Nematode pine jẹ endoparasite migratory ti a sọ di mimọ lati fa awọn adanu ọrọ-aje to lagbara ni awọn ilolupo igbo igbo. Iwadi lọwọlọwọ ṣe atunyẹwo iṣẹ ṣiṣe nematidal ti indoles halogenated lodi si awọn nematodes pine ati ilana iṣe wọn. Awọn iṣẹ nematidal ti 5-iodoindole ati avermectin (iṣakoso rere) lodi si awọn nematodes pine jẹ iru ati giga ni awọn ifọkansi kekere (10 μg/mL). 5-iodoindole dinku ọmọ inu oyun, iṣẹ ibisi, oyun ati iku idin, ati ihuwasi locomotor. Awọn ibaraẹnisọrọ molikula ti awọn ligands pẹlu invertebrate-pato glutamate-gated chloride channel receptors ṣe atilẹyin imọran pe 5-iodoindole, bii avermectin, sopọ mọ ni wiwọ si aaye ti nṣiṣe lọwọ olugba. 5-Iodoindole tun fa ọpọlọpọ awọn abuku phenotypic ni awọn nematodes, pẹlu idarudapọ awọn ẹya ara ajeji ati isunmọ ti o pọ si. Awọn abajade wọnyi daba pe awọn vacuoles le ṣe ipa kan ninu iku mediated nematode methylation. Ni pataki, 5-iodoindole kii ṣe majele ti si awọn eya ọgbin mejeeji (eso kabeeji ati radish). Bayi, iwadi yii ṣe afihan pe ohun elo iodoindole labẹ awọn ipo ayika le ṣakoso ipalara pine wilt.
nematode igi Pine (Bursaphelenchus xylophilus) jẹ ti awọn nematodes igi pine (PWN), awọn nematodes endoparasitic migratory ti a mọ lati fa ibajẹ ilolupo ilolupo si awọn ilana ilolupo igbo pine1. Pine wilt arun (PWD) ṣẹlẹ nipasẹ awọn igi pine nematode ti wa ni di isoro pataki lori orisirisi awọn continents, pẹlu Asia ati Europe, ati ni North America, awọn nematode destroys awọn Pine eya1,2. Idinku igi Pine jẹ iṣoro ọrọ-aje pataki, ati ireti ti itankale agbaye rẹ jẹ aibalẹ3. Awọn eya pine wọnyi jẹ ikọlu julọ nipasẹ nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, ati Pinus radiata4. Pine nematode jẹ arun to ṣe pataki ti o le pa awọn igi pine laarin awọn ọsẹ tabi awọn oṣu ti akoran. Ni afikun, awọn ibesile nematode pine jẹ wọpọ ni ọpọlọpọ awọn ilolupo eda abemi, nitorinaa a ti fi idi awọn ẹwọn ikolu ti o tẹsiwaju1.
Bursaphelenchus xylophilus jẹ nematode ti o ya sọtọ ọgbin-parasitic ti o jẹ ti idile Aphelenchoidea ati clade 102.5. Nematode n jẹun lori elu ati pe o tun ṣe ni awọn igi igi ti awọn igi pine, ti o dagbasoke si awọn ipele idin mẹrin ti o yatọ: L1, L2, L3, L4 ati agba kọọkan1,6. Labẹ awọn ipo ti aito ounjẹ, pine nematode kọja sinu ipele idin amọja kan - dauer, eyiti o ṣe itọsi fekito rẹ - beetle igi pine (Monochamus alternatus) ati pe o gbe lọ si awọn igi pine ti o ni ilera. Ni awọn ọmọ-ogun ti o ni ilera, awọn nematodes yarayara lọ nipasẹ awọn ohun elo ọgbin ati ifunni lori awọn sẹẹli parenchymatous, eyiti o yori si nọmba awọn aati hypersensitivity, pine wilting ati iku laarin ọdun kan lẹhin akoran1,7,8.
Iṣakoso ti isedale ti awọn nematodes Pine ti jẹ ipenija fun igba pipẹ, pẹlu awọn iwọn iyasọtọ ti o bẹrẹ si ọrundun 20th. Awọn ilana lọwọlọwọ fun ṣiṣakoso awọn nematodes pine ni akọkọ pẹlu awọn itọju kemikali, pẹlu fumigation igi ati dida awọn nematicides sinu awọn ẹhin igi. Awọn nematicides ti o wọpọ julọ lo jẹ avermectin ati avermectin benzoate, eyiti o jẹ ti idile avermectin. Awọn kemikali gbowolori wọnyi munadoko pupọ si ọpọlọpọ awọn eya nematode ati pe a kà si ailewu ayika. Bibẹẹkọ, lilo leralera ti awọn nematicides wọnyi ni a nireti lati ṣẹda titẹ yiyan ti yoo fẹrẹẹ daju pe yoo yorisi ifarahan ti awọn nematodes Pine sooro, bi a ti ṣe afihan fun ọpọlọpọ awọn ajenirun kokoro, gẹgẹbi Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ati awọn nematodes Trichostrongylus colubriformis ati Ostertagia ti ni idagbasoke diẹdiẹ10. Nitorinaa, awọn ilana resistance nilo lati ṣe iwadi nigbagbogbo ati ibojuwo nematicides nigbagbogbo lati wa yiyan, idiyele-doko ati awọn igbese ore ayika lati ṣakoso PVD. Ni awọn ewadun to ṣẹṣẹ, nọmba awọn onkọwe ti dabaa lilo awọn ayokuro ọgbin, awọn epo pataki ati awọn iyipada bi awọn aṣoju iṣakoso nematode13,14,15,16.
Laipẹ a ṣe afihan iṣẹ-ṣiṣe nematidal ti indole, intercellular kan ati ami ami interkingdom, ni Caenorhabditis elegans 17. Indole jẹ ifihan agbara intracellular ti o ni ibigbogbo ni ilolupo ẹda microbial, ti n ṣakoso awọn iṣẹ lọpọlọpọ ti o ni ipa lori physiology microbial, spore formation, iduroṣinṣin plasmid, resistance oogun, iṣelọpọ biofilm, ati virulence 18, 19. Iṣẹ ṣiṣe ti indole ati awọn itọsẹ rẹ lodi si awọn nematodes pathogenic miiran ko ti ṣe iwadi. Ninu iwadi yii, a ṣe iwadii iṣẹ-ṣiṣe nemacidal ti awọn indoles 34 lodi si awọn nematodes pine ati ṣe alaye ilana iṣe ti 5-iodoindole ti o lagbara julọ nipa lilo microscopy, fọtoyiya akoko-akoko, ati awọn adanwo docking molikula, ati ṣe ayẹwo awọn ipa majele ti awọn ohun ọgbin nipa lilo igbelewọn germination irugbin.
Awọn ifọkansi giga (> 1.0 mM) ti indole ti jẹ ijabọ tẹlẹ lati ni ipa nematidal lori nematodes17. Lẹhin itọju ti B. xylophilus (awọn ipele igbesi aye ti o dapọ) pẹlu indole tabi 33 awọn itọsẹ indole ti o yatọ ni 1 mM, iku ti B. xylophilus ni iwọn nipasẹ kika awọn nematodes laaye ati awọn ti o ku ni iṣakoso ati awọn ẹgbẹ ti a ṣe itọju. Indoles marun ṣe afihan iṣẹ ṣiṣe nematidal pataki; iwalaaye ti ẹgbẹ iṣakoso ti ko ni itọju jẹ 95 ± 7% lẹhin awọn wakati 24. Ninu awọn indoles 34 ti a ṣe idanwo, 5-iodoindole ati 4-fluoroindole ni 1 mM fa iku iku 100%, lakoko ti 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, ati 7-iodoindole fa isunmọ 50% iku (Table 1).
Ipa ti 5-iodoindole lori iṣelọpọ vacuole ati iṣelọpọ ti nematode igi pine. (A) Ipa ti avermectin ati 5-iodoindole lori awọn nematodes agbalagba ọkunrin, (B) L1 ipele nematode eyin ati (C) ti iṣelọpọ ti B. xylophilus, (i) vacuoles ko ṣe akiyesi ni 0 h, itọju ti o jẹ abajade (ii) vacuoles, (iii) ikojọpọ ti vacuoles pupọ, (ivfusion) ati wiwu ti vacuoles pupọ, (ivfusion) (vi) Ibiyi ti omiran vacuoles. Awọn ọfa pupa tọkasi wiwu ti vacuoles, awọn ọfa buluu tọkasi idapọ ti awọn vacuoles ati awọn ọfa dudu tọkasi awọn vacuoles nla. Pẹpẹ iwọn = 50 μm.
Ni afikun, iwadi yii tun ṣe apejuwe ilana ti o tẹle ti methane-induced iku ni pine nematodes (Figure 4C). Iku Methanogenic jẹ iru ti kii ṣe apoptotic ti iku sẹẹli ti o ni nkan ṣe pẹlu ikojọpọ ti cytoplasmic vacuoles27 olokiki. Awọn abawọn mofoloji ti a ṣe akiyesi ni awọn nematodes pine dabi ẹni ti o ni ibatan pẹkipẹki si siseto ti methane-induced iku. Ayẹwo airi ni awọn oriṣiriṣi awọn akoko fihan pe awọn vacuoles omiran ni a ṣẹda lẹhin awọn wakati 20 ti ifihan si 5-iodoindole (0.1 mM). A ṣe akiyesi awọn vacuoles microscopic lẹhin awọn wakati 8 ti itọju, ati pe nọmba wọn pọ si lẹhin awọn wakati 12. Ọpọlọpọ awọn vacuoles nla ni a ṣe akiyesi lẹhin awọn wakati 14. Ọpọlọpọ awọn vacuoles ti o dapọ ni o han kedere lẹhin awọn wakati 12-16 ti itọju, ti o nfihan pe idapọ vacuole jẹ ipilẹ ti ẹrọ iku methanogenic. Lẹhin awọn wakati 20, ọpọlọpọ awọn vacuoles omiran ni a rii jakejado alajerun naa. Awọn akiyesi wọnyi jẹ aṣoju iroyin akọkọ ti metuosis ni C. elegans.
Ni awọn kokoro ti a ṣe itọju 5-iodoindole, ikojọpọ vacuole ati rupture ni a tun ṣe akiyesi (Fig. 5), bi a ti jẹri nipasẹ atunse kokoro ati idasilẹ vacuole sinu ayika. A tun ṣe akiyesi idalọwọduro Vacuole ninu awo ẹyin ẹyin, eyiti o tọju deede nipasẹ L2 lakoko hatching (Afikun Ọpọtọ. S2). Awọn akiyesi wọnyi ṣe atilẹyin ilowosi ti ikojọpọ omi ati ikuna osmoregulatory, bakanna bi ipalara sẹẹli iyipada (RCI), ninu ilana iṣelọpọ vacuole ati suppuration (Fig. 5).
Ni sisọ ipa ti iodine ninu iṣelọpọ vacuole ti a ṣe akiyesi, a ṣe iwadii iṣẹ nematidal ti iṣuu soda iodide (NaI) ati potasiomu iodide (KI). Bibẹẹkọ, ni awọn ifọkansi (0.1, 0.5 tabi 1 mM), wọn ko ni ipa boya iwalaaye nematode tabi iṣelọpọ vacuole (Afikun Fig. S5), botilẹjẹpe 1 mM KI ni ipa nematidal diẹ. Ni apa keji, 7-iodoindole (1 tabi 2 mM), bii 5-iodoindole, ti fa ọpọlọpọ awọn vacuoles ati awọn abuku igbekalẹ (Afikun Fig. S6). Awọn iodoindoles meji ṣe afihan awọn abuda phenotypic ti o jọra ni awọn nematodes pine, lakoko ti NaI ati KI ko ṣe. O yanilenu, indole ko fa idasile vacuole ni B. xylophilus ni awọn ifọkansi idanwo (data ko han). Nitorinaa, awọn abajade jẹri pe eka indole-iodine jẹ iduro fun igbaradi ati iṣelọpọ ti B. xylophilus.
Lara awọn indoles ti a ṣe idanwo fun iṣẹ-ṣiṣe nematicidal, 5-iodoindole ni itọka isokuso ti o ga julọ ti -5.89 kcal / mol, ti o tẹle 7-iodoindole (-4.48 kcal / mol), 4-fluoroindole (-4.33), ati indole (-4.03) (Nọmba 6). Isopọmọ hydrogen ẹhin ti o lagbara ti 5-iodoindole si leucine 218 ṣe idaduro isọdọkan rẹ, lakoko ti gbogbo awọn itọsẹ indole miiran sopọ mọ serine 260 nipasẹ awọn ifunmọ hydrogen ẹgbẹ. Lara awọn iodoindoles miiran ti a ṣe apẹẹrẹ, 2-iodoindole ni iye idiwọn ti -5.248 kcal / mol, eyiti o jẹ nitori iṣeduro hydrogen akọkọ rẹ pẹlu leucine 218. Awọn abuda miiran ti a mọ pẹlu 3-iodoindole (-4.3 kcal / mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/mol.) kcal / mol. (Ifikun olusin S8). Pupọ awọn indoles halogenated ati indole funrararẹ, pẹlu ayafi ti 5-iodoindole ati 2-iodoindole, ṣe ifunmọ pẹlu serine 260. Nitootọ pe isunmọ hydrogen pẹlu leucine 218 jẹ itọkasi ti abuda receptor-ligand ti o munadoko, bi a ti ṣe akiyesi ivermectin (Afikun Ọpọtọ. S5-iodoindole) ivermectin, di ni wiwọ si aaye ti nṣiṣe lọwọ ti olugba GluCL nipasẹ leucine 218 (Fig. 6 ati Apọju S8). A daba pe a nilo isọdọmọ yii lati ṣetọju ọna-iṣiro ṣiṣi ti eka GluCL ati pe nipa diduro ni wiwọ si aaye ti nṣiṣe lọwọ ti olugba GluCL, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ati ivermectin nitorinaa ṣetọju ikanni ion ṣii ati gba gbigba omi laaye.
Docking molikula ti indole ati indole halogenated si GluCL. Awọn itọnisọna abuda ti (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, ati (D) 5-iodoindole ligands si aaye ti nṣiṣe lọwọ ti GluCL. Awọn amuaradagba jẹ aṣoju nipasẹ tẹẹrẹ kan, ati awọn iwe ẹhin hydrogen ti o wa ni ẹhin jẹ afihan bi awọn laini aami ofeefee. (A'), (B'), (C'), ati (D') ṣe afihan awọn ibaraenisepo ti awọn ligands ti o baamu pẹlu awọn iṣẹku amino acid agbegbe, ati awọn ifunmọ hydrogen-ẹgbẹ jẹ itọkasi nipasẹ awọn itọka ti o ni aami Pink.
Awọn idanwo ni a ṣe lati ṣe iṣiro ipa majele ti 5-iodoindole lori germination ti eso kabeeji ati awọn irugbin radish. 5-iodoindole (0.05 tabi 0.1 mM) tabi avermectin (10 μg/mL) ni diẹ tabi ko ni ipa lori germination ni ibẹrẹ ati ifarahan ọgbin (Aworan 7). Ni afikun, ko si iyatọ nla ti a rii laarin oṣuwọn germination ti awọn iṣakoso ti ko ni itọju ati awọn irugbin ti a tọju pẹlu 5-iodoindole tabi avermectin. Ipa lori elongation taproot ati nọmba awọn gbongbo ita ti a ṣẹda ko ṣe pataki, botilẹjẹpe 1 mM (awọn akoko 10 ifọkansi ti nṣiṣe lọwọ) ti 5-iodoindole ni idaduro idagbasoke ti awọn gbongbo ita. Awọn abajade wọnyi tọka pe 5-iodoindole kii ṣe majele si awọn sẹẹli ọgbin ati pe ko dabaru pẹlu awọn ilana idagbasoke ọgbin ni awọn ifọkansi ti a ṣe iwadi.
Ipa ti 5-iodoindole lori dida irugbin. Germination, sprouting ati rutini ita ti B. oleracea ati awọn irugbin R. raphanistrum lori Murashige ati Skoog agar alabọde pẹlu tabi laisi avermectin tabi 5-iodoindole. Germination ti gbasilẹ lẹhin awọn ọjọ 3 ti abeabo ni 22°C.
Iwadi yii ṣe ijabọ ọpọlọpọ awọn ọran ti pipa nematode nipasẹ awọn indoles. Ni pataki, eyi ni ijabọ akọkọ ti iodoindole inducing methylation (ilana kan ti o fa nipasẹ ikojọpọ ti awọn vacuoles kekere ti o dapọ diẹdiẹ sinu awọn vacuoles nla, nikẹhin ti o yori si rupture awo ati iku) ni awọn abere igi pine, pẹlu iodoindole ti n ṣafihan awọn ohun-ini nematicidal pataki ti o jọra si awọn ti nematicide avermectin ti iṣowo.
Indoles ti ni ijabọ tẹlẹ lati ṣe awọn iṣẹ ami ifihan pupọ ni awọn prokaryotes ati eukaryotes, pẹlu idinamọ / idasile biofilm, iwalaaye kokoro-arun, ati pathogenicity19,32,33,34. Laipẹ, awọn ipa itọju ailera ti awọn indoles halogenated, indole alkaloids, ati awọn itọsẹ indole semisynthetic ti fa iwulo iwadii lọpọlọpọ35,36,37. Fun apẹẹrẹ, awọn indoles halogenated ti han lati pa Escherichia coli ti o tẹsiwaju ati awọn sẹẹli Staphylococcus aureus37. Ni afikun, o jẹ iwulo imọ-jinlẹ lati ṣe iwadi ipa ti awọn indoles halogenated lodi si awọn eya miiran, ipilẹṣẹ, ati awọn ijọba, ati pe iwadii yii jẹ igbesẹ kan si iyọrisi ibi-afẹde yii.
Nibi, a dabaa ilana kan fun 5-iodoindole-induced lethality ni C. elegans ti o da lori ipalara sẹẹli iyipada (RCI) ati methylation (Awọn nọmba 4C ati 5). Awọn iyipada edematous gẹgẹbi wiwu ati irẹwẹsi vacuolar jẹ awọn afihan ti RCI ati methylation, ti o farahan bi awọn vacuoles omiran ni cytoplasm48,49. RCI dabaru pẹlu iṣelọpọ agbara nipasẹ didin iṣelọpọ ATP, nfa ikuna ti fifa ATPase, tabi idalọwọduro awọn membran sẹẹli ati nfa ṣiṣan iyara ti Na +, Ca2 +, ati omi50,51,52. Awọn vacuoles intracytoplasmic dide ninu awọn sẹẹli ẹranko nitori abajade ikojọpọ omi ninu cytoplasm nitori ṣiṣan ti Ca2+ ati omi53. O yanilenu, ilana yii ti ibajẹ sẹẹli jẹ iyipada ti ibajẹ naa ba jẹ igba diẹ ati pe awọn sẹẹli bẹrẹ lati ṣe ATP fun igba diẹ, ṣugbọn ti ibajẹ naa ba wa tabi buru si, awọn sẹẹli naa ku.
Awọn phenotype methylation ti o fa nipasẹ 5-iodoindole ni B. xylophilus le jẹ nitori wiwa ti iodine ati pinpin molikula rẹ, niwon 7-iodoindole ti ni ipa ti o kere si lori B. xylophilus ju 5-iodoindole (Table 1 ati S6 Apejuwe Aworan). Awọn abajade wọnyi jẹ apakan ni ibamu pẹlu awọn iwadi ti Maltese et al. (2014), ti o royin pe iyipada ti pyridyl nitrogen moiety ni indole lati para- si ipo-meta ti paarẹ vacuolization, idinamọ idagbasoke, ati cytotoxicity ninu awọn sẹẹli U251, ni iyanju pe ibaraenisepo ti moleku pẹlu aaye kan pato ti nṣiṣe lọwọ ninu amuaradagba jẹ pataki27,44,45. Awọn ibaraẹnisọrọ laarin indole tabi halogenated indoles ati awọn olugba GluCL ti a ṣe akiyesi ninu iwadi yii tun ṣe atilẹyin imọran yii, bi 5- ati 2-iodoindole ni a ri lati sopọ mọ awọn olugba GluCL diẹ sii ni agbara ju awọn indoles miiran ti a ṣe ayẹwo (Nọmba 6 ati S8 Afikun). Iodine ni ipo keji tabi karun ti indole ni a rii lati sopọ mọ leucine 218 ti olugba GluCL nipasẹ awọn ifunmọ hydrogen ẹhin, lakoko ti awọn indoles halogenated miiran ati indole funrararẹ ṣe awọn ifunmọ hydrogen ẹgbẹ-pq alailagbara pẹlu serine 260 (Nọmba 6). Nitorinaa a ṣe akiyesi pe isọdi ti halogen ṣe ipa pataki ninu ifakalẹ ti degeneration vacuolar, bi o ti jẹ pe isọdọkan 5-iodoindole jẹ ki ikanni ion ṣii ṣii, nitorinaa gbigba ṣiṣan omi iyara ati rupture vacuole. Sibẹsibẹ, ilana alaye ti iṣe ti 5-iodoindole wa lati pinnu.
Ṣaaju ohun elo to wulo ti 5-iodoindole, ipa majele rẹ lori awọn irugbin yẹ ki o ṣe itupalẹ. Awọn adanwo dida irugbin wa fihan pe 5-iodoindole ko ni ipa odi lori dida irugbin tabi awọn ilana idagbasoke ti o tẹle ni awọn ifọkansi ti a ṣe iwadi (Nọmba 7). Nitorinaa, iwadii yii n pese ipilẹ fun lilo 5-iodoindole ni agbegbe ilolupo lati ṣakoso ipalara ti awọn nematodes pine si awọn igi pine.
Awọn ijabọ iṣaaju ti ṣe afihan pe itọju ailera ti o da lori indole duro fun ọna ti o pọju lati koju iṣoro ti resistance aporo aporo ati lilọsiwaju akàn55. Ni afikun, indoles ni antibacterial, anticancer, antioxidant, anti-inflammatory, antidiabetic, antiviral, antiproliferative and antituberculosis ati pe o le ṣiṣẹ bi ipilẹ ileri fun idagbasoke oogun56,57. Iwadi yii ni imọran fun igba akọkọ lilo agbara ti iodine bi antiparasitic ati oluranlowo anthelmintic.
Avermectin ni a ṣe awari ni ọdun mẹta sẹyin o gba Ebun Nobel ni ọdun 2015, ati pe lilo rẹ bi anthelmintic tun n tẹsiwaju lọwọ. Bibẹẹkọ, nitori idagbasoke iyara ti resistance si avermectins ni nematodes ati awọn ajenirun kokoro, yiyan, idiyele kekere, ati ilana ore ayika ni a nilo lati ṣakoso ikolu PWN ni awọn igi pine. Iwadi yii tun ṣe ijabọ ilana nipasẹ eyiti 5-iodoindole pa awọn nematodes pine ati pe 5-iodoindole ni eero kekere si awọn sẹẹli ọgbin, eyiti o ṣii awọn ireti to dara fun ohun elo iṣowo iwaju rẹ.
Gbogbo awọn adanwo ni a fọwọsi nipasẹ Igbimọ Ethics ti Ile-ẹkọ giga Yeungnam, Gyeongsan, Korea, ati awọn ọna ti a ṣe ni ibamu pẹlu awọn itọsọna ti Igbimọ Ethics ti Ile-ẹkọ giga Yeungnam.
Awọn adanwo idawọle ẹyin ni a ṣe ni lilo awọn ilana ti iṣeto43. Lati ṣe ayẹwo awọn oṣuwọn hatching (HR), nematodes agbalagba ọjọ-ọjọ 1 (isunmọ awọn obinrin 100 ati awọn ọkunrin 100) ni a gbe lọ si awọn ounjẹ Petri ti o ni fungus ati gba laaye lati dagba fun wakati 24. Awọn eyin ti ya sọtọ ati mu pẹlu 5-iodoindole (0.05 mM ati 0.1 mM) tabi avermectin (10 μg/ml) bi idaduro ni omi distilled. Awọn idaduro wọnyi (500 μl; to awọn ẹyin 100) ni a gbe lọ si awọn kanga ti awo-ara ti ara 24-daradara ati ti a fi sii ni 22 °C. Awọn iṣiro L2 ni a ṣe lẹhin awọn wakati 24 ti abeabo ṣugbọn wọn kà pe o ku ti awọn sẹẹli naa ko ba gbe nigba ti o ni itara pẹlu okun waya Pilatnomu to dara. A ṣe idanwo yii ni awọn ipele meji, ọkọọkan pẹlu awọn atunwi mẹfa. Awọn data lati awọn idanwo mejeeji ni idapo ati gbekalẹ. Iwọn ogorun ti HR jẹ iṣiro bi atẹle:
A ṣe ayẹwo iku iku ni lilo awọn ilana ti a ti dagbasoke tẹlẹ. Awọn ẹyin Nematode ni a kojọ ati awọn ọmọ inu oyun ni a muuṣiṣẹpọ nipasẹ didin ninu omi distilled ni ifo lati ṣe ina idin ipele L2. Awọn idin ti a ṣepọ (iwọn 500 nematodes) ni a ṣe itọju pẹlu 5-iodoindole (0.05 mM ati 0.1 mM) tabi avermectin (10 μg / milimita) ati dagba lori awọn awo B. cinerea Petri. Lẹhin awọn wakati 48 ti abeabo ni 22 °C, awọn nematodes ni a gba sinu omi ti o ni itọsi ti ko ni ifo ati ṣayẹwo fun wiwa L2, L3, ati awọn ipele L4. Iwaju awọn ipele L3 ati L4 tọkasi iyipada idin, lakoko ti wiwa ipele L2 ko tọka si iyipada. Awọn aworan ti wa ni ipasẹ ni lilo iRiS™ Digital Cell Aworan System. A ṣe idanwo yii ni awọn ipele meji, ọkọọkan pẹlu awọn atunwi mẹfa. Awọn data lati awọn idanwo mejeeji ni idapo ati gbekalẹ.
Majele ti 5-iodoindole ati avermectin si awọn irugbin ni a ṣe ayẹwo nipa lilo awọn idanwo germination lori Murashage ati Skoog agar plates.62 B. oleracea ati awọn irugbin R. raphanistrum ni a kọkọ fi sinu omi distilled sterile fun ọjọ kan, ti a fo pẹlu 1 milimita 100% ethanol sodium, 1 ml 50 ti iṣowo (3%) 15 min, ati ki o fo ni igba marun pẹlu 1 milimita omi aimọ. Awọn irugbin sterilized lẹhinna ti tẹ sori awọn awo agar germination ti o ni 0.86 g/l (0.2X) Murashage ati alabọde Skoog ati 0.7% agar bacteriological pẹlu tabi laisi 5-iodoindole tabi avermectin. Awọn awo naa ti wa ni abẹlẹ ni 22 °C, ati awọn aworan ti a ya lẹhin awọn ọjọ 3 ti abeabo. A ṣe idanwo yii ni awọn ipele meji, ọkọọkan wọn ni awọn atunwi mẹfa.
Akoko ifiweranṣẹ: Kínní-26-2025