Iwadi yii ṣe ayẹwo apaniyan, subthality, ati majele ti iṣowocypermethrinformulations to anuran tadpoles. Ninu idanwo nla, awọn ifọkansi ti 100-800 μg/L ni idanwo fun awọn wakati 96. Ninu idanwo onibaje, awọn ifọkansi cypermethrin ti o nwaye nipa ti ara (1, 3, 6, ati 20 μg/L) ni idanwo fun iku, atẹle nipasẹ idanwo micronucleus ati awọn ajeji iparun sẹẹli ẹjẹ pupa fun awọn ọjọ 7. LC50 ti iṣelọpọ cypermethrin ti iṣowo si awọn tadpoles jẹ 273.41 μg L-1. Ninu idanwo onibajẹ, ifọkansi ti o ga julọ (20 μg L-1) yorisi diẹ sii ju 50% iku, bi o ti pa idaji awọn tadpoles idanwo. Idanwo micronucleus ṣe afihan awọn abajade pataki ni 6 ati 20 μg L-1 ati ọpọlọpọ awọn aiṣedeede iparun ti a rii, ti o fihan pe iṣelọpọ cypermethrin ti iṣowo ni agbara genotoxic lodi si P. gracilis. Cypermethrin jẹ eewu ti o ga julọ fun eya yii, o nfihan pe o le fa awọn iṣoro pupọ ati ni ipa lori awọn ipa ti ilolupo eda ni kukuru ati igba pipẹ. Nitorina, o le pari pe awọn iṣeduro cypermethrin ti iṣowo ni awọn ipa-ipa oloro lori P. gracilis.
Nitori awọn lemọlemọfún imugboroosi ti ogbin akitiyan ati lekoko ohun elo tikokoro iṣakosoawọn iwọn, awọn ẹranko inu omi nigbagbogbo farahan si awọn ipakokoropaeku1,2. Idoti ti awọn orisun omi nitosi awọn aaye ogbin le ni ipa lori idagbasoke ati iwalaaye ti awọn oganisimu ti kii ṣe ibi-afẹde gẹgẹbi awọn amphibian.
Awọn Amphibians ti n di pataki pupọ si iṣiro ti awọn matrices ayika. Anurans ni a gba pe awọn olutọka ti o dara ti awọn idoti ayika nitori awọn abuda alailẹgbẹ wọn gẹgẹbi awọn iyipo igbesi aye eka, awọn iwọn idagba idin iyara, ipo trophic, awọ ara permeable10,11, igbẹkẹle lori omi fun ẹda12 ati awọn ẹyin ti ko ni aabo11,13,14. Ọpọlọ omi kekere ( Physalaemus gracilis ), ti a mọ nigbagbogbo si ọpọlọ ẹkún, ti han lati jẹ ẹya bioindicator ti idoti ipakokoropaeku4,5,6,7,15. Eya naa wa ni awọn omi iduro, awọn agbegbe aabo tabi awọn agbegbe pẹlu ibugbe iyipada ni Argentina, Urugue, Paraguay ati Brazil1617 ati pe o jẹ iduroṣinṣin nipasẹ ipinsi IUCN nitori pinpin jakejado ati ifarada ti awọn ibugbe oriṣiriṣi18.
Awọn ipa sublethal ti royin ni awọn amphibians ti o tẹle ifihan si cypermethrin, pẹlu ihuwasi, morphological ati awọn iyipada biokemika ni tadpoles23,24,25, iyipada iku ati akoko metamorphosis, awọn iyipada enzymatic, aṣeyọri hatching dinku24,25, hyperactivity26, idinamọ ti iṣẹ ṣiṣe cholinesterase27 ati awọn ayipada swimm27. Sibẹsibẹ, awọn ijinlẹ ti awọn ipa genotoxic ti cypermethrin ni awọn amphibian jẹ opin. Nitorina, o ṣe pataki lati ṣe ayẹwo ifarabalẹ ti awọn eya anura si cypermethrin.
Idoti ayika ni ipa lori idagbasoke deede ati idagbasoke ti awọn amphibian, ṣugbọn ipa buburu ti o ṣe pataki julọ jẹ ibajẹ jiini si DNA ti o fa nipasẹ ifihan ipakokoropae13. Onínọmbà ẹ̀jẹ̀ sẹ́ẹ̀lì ẹ̀jẹ̀ jẹ́ olùtọ́ka jíjinlẹ̀ tó ṣe pàtàkì fún ìbàjẹ́ àti májèlé tó lè jẹ́ ohun kan sí ẹ̀yà igbó29. Idanwo micronucleus jẹ ọkan ninu awọn ọna ti o wọpọ julọ ti a lo fun ṣiṣe ipinnu genotoxicity ti awọn kemikali ni agbegbe30. O jẹ ọna ti o yara, imunadoko ati ilamẹjọ ti o jẹ afihan ti o dara fun idoti kemikali ti awọn ohun alumọni bii amphibians31,32 ati pe o le pese alaye lori ifihan si awọn idoti genotoxic33.
Idi ti iwadii yii ni lati ṣe iṣiro agbara majele ti awọn agbekalẹ cypermethrin ti iṣowo si awọn tadpoles omi kekere nipa lilo idanwo micronucleus ati igbelewọn eewu ilolupo.
Iku ikumulative (%) ti P. gracilis tadpoles ti o farahan si awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti cypermethrin ti iṣowo lakoko akoko nla ti idanwo naa.
Iku ikumulative (%) ti P. gracilis tadpoles ti o farahan si awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti cypermethrin ti iṣowo lakoko idanwo onibaje.
Iku iku ti o ga julọ ti a ṣe akiyesi jẹ abajade ti awọn ipa genotoxic ni awọn amphibians ti o farahan si awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti cypermethrin (6 ati 20 μg / L), bi a ti jẹri nipasẹ wiwa micronuclei (MN) ati awọn ajeji iparun ni awọn erythrocytes. Ipilẹṣẹ ti MN tọkasi awọn aṣiṣe ni mitosis ati pe o ni nkan ṣe pẹlu isomọ ti ko dara ti awọn chromosomes si awọn microtubules, awọn abawọn ninu awọn eka amuaradagba ti o ni iduro fun gbigbe ati gbigbe chromosome, awọn aṣiṣe ni ipinya chromosome ati awọn aṣiṣe ni ibajẹ DNA titunṣe38,39 ati pe o le ni ibatan si ipakokoro-induced oxidative stress40,41. Awọn aiṣedeede miiran ni a ṣe akiyesi ni gbogbo awọn ifọkansi ti a ṣe ayẹwo. Alekun awọn ifọkansi cypermethrin pọ si awọn aiṣedeede iparun ni awọn erythrocytes nipasẹ 5% ati 20% ni asuwon ti (1 μg/L) ati ti o ga julọ (20 μg/L), lẹsẹsẹ. Fun apẹẹrẹ, awọn iyipada ninu DNA ti ẹda kan le ni awọn abajade to ṣe pataki fun iwalaaye kukuru- ati igba pipẹ, ti o yọrisi idinku awọn eniyan, iyipada amọdaju ti ibisi, isọdọmọ, isonu ti oniruuru jiini, ati awọn oṣuwọn ijira ti yipada. Gbogbo awọn nkan wọnyi le ni ipa lori iwalaaye eya ati itọju42,43. Ipilẹṣẹ awọn aiṣedeede erythroid le ṣe afihan bulọọki kan ninu cytokinesis, ti o mu ki pipin sẹẹli ti ko niiṣe (awọn erythrocytes ti a ti pin) 44,45; awọn ekuro multilobed jẹ awọn ilọsiwaju ti awo ilu iparun pẹlu ọpọ lobes46, lakoko ti awọn ajeji erythroid miiran le ni nkan ṣe pẹlu imudara DNA, gẹgẹbi awọn kidinrin iparun/blebs47. Iwaju awọn erythrocytes anucleated le tọkasi gbigbe ọkọ atẹgun ailagbara, paapaa ninu omi ti a ti doti48,49. Apoptosis tọkasi iku sẹẹli50.
Awọn ijinlẹ miiran ti tun ṣe afihan awọn ipa genotoxic ti cypermethrin. Kabaña et al.51 ṣe afihan wiwa awọn micronuclei ati awọn iyipada iparun gẹgẹbi awọn sẹẹli binucleated ati awọn sẹẹli apoptotic ninu awọn sẹẹli Odontophrynus americanus lẹhin ifihan si awọn ifọkansi giga ti cypermethrin (5000 ati 10,000 μg L-1) fun 96 h. Apoptosis ti o fa Cypermethrin ni a tun rii ni P. biligonigerus52 ati Rhinella arenarum53. Awọn abajade wọnyi daba pe cypermethrin ni awọn ipa genotoxic lori ọpọlọpọ awọn oganisimu omi ati pe idanwo MN ati ENA le jẹ afihan awọn ipa abẹlẹ lori awọn amphibian ati pe o le wulo fun awọn eya abinibi ati awọn olugbe egan ti o farahan si awọn majele12.
Awọn agbekalẹ ti iṣowo ti cypermethrin jẹ eewu ayika ti o ga (mejeeji nla ati onibaje), pẹlu awọn HQ ti o kọja ipele Ile-iṣẹ Idaabobo Ayika AMẸRIKA (EPA) 54 ti o le ni ipa lori eeya ti o ba wa ni agbegbe. Ninu igbelewọn eewu onibaje, NOEC fun iku jẹ 3 μg L-1, ifẹsẹmulẹ pe awọn ifọkansi ti a rii ninu omi le jẹ eewu si eya55. NOEC apaniyan fun awọn idin arenarum R. ti o farahan si adalu endosulfan ati cypermethrin jẹ 500 μg L-1 lẹhin 168 h; iye yii dinku si 0.0005 μg L-1 lẹhin awọn wakati 336. Awọn onkọwe fihan pe gigun ti ifihan, dinku awọn ifọkansi ti o jẹ ipalara si eya naa. O tun ṣe pataki lati ṣe afihan pe awọn iye NOEC ti o ga ju ti P. gracilis ni akoko ifihan kanna, ti o nfihan pe idahun eya si cypermethrin jẹ ẹya-pato. Pẹlupẹlu, ni awọn ofin ti iku, iye CHQ ti P. gracilis lẹhin ifihan si cypermethrin ti de 64.67, eyi ti o ga ju iye itọkasi ti a ṣeto nipasẹ US Environmental Protection Agency54, ati iye CHQ ti R. arenarum larvae tun ga ju iye yii lọ (CHQ> 388.00 ti a ṣe iwadi) ni 336 ti o pọju ewu ti o ga julọ ti o wa ni ewu ti o ga julọ ti o wa ni 33dicide. orisirisi awọn eya amphibian. Ni imọran pe P. gracilis nilo isunmọ awọn ọjọ 30 lati pari metamorphosis56, o le pari pe awọn ifọkansi iwadi ti cypermethrin le ṣe alabapin si idinku awọn eniyan nipa idilọwọ awọn ẹni-kọọkan ti o ni akoran lati titẹ si agbalagba tabi ipele ibisi ni ọjọ-ori.
Ninu iṣiro eewu iṣiro ti micronuclei ati awọn ajeji iparun erythrocyte miiran, awọn iye CHQ wa lati 14.92 si 97.00, ti o fihan pe cypermethrin ni eewu genotoxic ti o pọju si P. gracilis paapaa ni ibugbe adayeba rẹ. Ti o ba ṣe akiyesi iku iku, iṣeduro ti o pọju ti awọn agbo ogun xenobiotic ti o ni ifarada si P. gracilis jẹ 4.24 μg L-1. Sibẹsibẹ, awọn ifọkansi bi kekere bi 1 μg/L tun ṣe afihan awọn ipa genotoxic. Otitọ yii le ja si ilosoke ninu nọmba awọn eniyan ajeji57 ati ni ipa lori idagbasoke ati ẹda ti awọn eya ni awọn ibugbe wọn, ti o yori si idinku ninu awọn olugbe amphibian.
Awọn agbekalẹ ti iṣowo ti cypermethrin insecticide ṣe afihan majele ti o ga ati onibaje si P. gracilis. Awọn oṣuwọn iku ti o ga julọ ni a ṣe akiyesi, o ṣee ṣe nitori awọn ipa majele, gẹgẹbi ẹri nipasẹ wiwa micronuclei ati awọn ajeji iparun erythrocyte, paapaa awọn ekuro serrated, awọn ekuro lobed, ati awọn ekuro vesicular. Ni afikun, eya ti a ṣe iwadi ṣe afihan awọn eewu ayika ti o pọ si, mejeeji nla ati onibaje. Awọn data wọnyi, ni idapo pẹlu awọn iwadi iṣaaju nipasẹ ẹgbẹ iwadii wa, fihan pe paapaa awọn agbekalẹ iṣowo ti o yatọ si ti cypermethrin tun fa idinku acetylcholinesterase (AChE) ati awọn iṣẹ butyrylcholinesterase (BChE) ati aapọn oxidative58, ati pe o fa awọn iyipada ninu iṣẹ iwẹwẹ ati awọn aiṣedeede ẹnu59 ni P. gracilis, ti o nfihan pe awọn ilana iṣowo ati awọn ilana isọdi-giga ti lethalcy eya. Hartmann et al. 60 ri pe awọn ilana iṣowo ti cypermethrin jẹ oloro julọ si P. gracilis ati awọn eya miiran ti iwin kanna (P. cuvieri) ni akawe pẹlu awọn ipakokoropaeku mẹsan miiran. Eyi daba pe awọn ifọkansi ti cypermethrin ti a fọwọsi labẹ ofin fun aabo ayika le ja si iku ti o ga ati idinku olugbe igba pipẹ.
Awọn iwadi siwaju sii ni a nilo lati ṣe ayẹwo majele ti ipakokoropaeku si awọn amphibian, bi awọn ifọkansi ti o wa ni ayika le fa iku ti o ga julọ ati pe o jẹ ewu ti o pọju si P. gracilis. Iwadi lori awọn eya amphibian yẹ ki o gba iwuri, bi data lori awọn ohun alumọni wọnyi ti ṣọwọn, ni pataki lori awọn ẹya ara ilu Brazil.
Idanwo majele ti onibaje duro fun awọn wakati 168 (ọjọ 7) labẹ awọn ipo aimi ati awọn ifọkansi sublethal jẹ: 1, 3, 6 ati 20 μg ai L-1. Ninu awọn idanwo mejeeji, 10 tadpoles fun ẹgbẹ itọju ni a ṣe ayẹwo pẹlu awọn ẹda mẹfa, fun apapọ 60 tadpoles fun ifọkansi. Nibayi, itọju omi-nikan ṣiṣẹ bi iṣakoso odi. Iṣeto idanwo kọọkan ni satelaiti gilasi ti o ni ifo pẹlu agbara ti 500 milimita ati iwuwo ti 1 tadpole fun 50 milimita ti ojutu. A fi fiimu polyethylene bo ikoko naa lati ṣe idiwọ evaporation ati pe o jẹ afẹfẹ nigbagbogbo.
A ṣe atupale omi ni kemikali lati pinnu awọn ifọkansi ipakokoropaeku ni 0, 96, ati 168 h. Ni ibamu si Sabin et al. 68 ati Martins et al. 69, awọn itupale ti a ṣe ni Ile-iṣẹ Itupalẹ Ipakokoropaeku (LARP) ti Ile-ẹkọ giga Federal ti Santa Maria nipa lilo chromatography gaasi pọ si awọn spectrometry ibi-pupọ quadrupole meteta (Varian model 1200, Palo Alto, California, USA). Ipinnu titobi ti awọn ipakokoropaeku ninu omi jẹ afihan bi ohun elo afikun (Table SM1).
Fun idanwo micronucleus (MNT) ati idanwo aiṣedeede iparun sẹẹli pupa (RNA), 15 tadpoles lati ẹgbẹ itọju kọọkan ni a ṣe atupale. Awọn tadpoles jẹ anesthetized pẹlu 5% lidocaine (50 miligiramu g-170) ati awọn ayẹwo ẹjẹ ni a gba nipasẹ puncture ọkan nipa lilo awọn sirinji heparinized isọnu. A ti pese awọn smear ẹjẹ lori awọn ifaworanhan maikirosikopu alaile, afẹfẹ ti o gbẹ, ti o wa titi pẹlu 100% methanol (4 °C) fun awọn iṣẹju 2, ati lẹhinna ni abawọn pẹlu ojutu 10% Giemsa fun awọn iṣẹju 15 ninu okunkun. Ni opin ilana naa, awọn ifaworanhan ni a fọ pẹlu omi ti a fi omi ṣan lati yọkuro ti o pọju ati ki o gbẹ ni iwọn otutu yara.
O kere ju 1000 RBC lati tadpole kọọkan ni a ṣe atupale nipa lilo microscope 100 × pẹlu ipinnu 71 lati pinnu wiwa MN ati ENA. Apapọ 75,796 RBC lati awọn tadpoles ni a ṣe ayẹwo ni imọran awọn ifọkansi cypermethrin ati awọn idari. A ṣe atupale Genotoxicity ni ibamu si ọna ti Carrasco et al. ati Fenech et al.38,72 nipa ṣiṣe ipinnu igbohunsafẹfẹ ti awọn ipalara iparun wọnyi: (1) awọn sẹẹli anucleate: awọn sẹẹli laisi awọn ekuro; (2) Àwọn sẹ́ẹ̀lì àpótípìkì: ìpínlẹ̀ àtọ̀runwá, ikú sẹ́ẹ̀lì tí a ṣètò; (3) awọn sẹẹli binucleate: awọn sẹẹli pẹlu awọn ekuro meji; (4) awọn egbọn iparun tabi awọn sẹẹli bleb: awọn sẹẹli ti o ni awọn ekuro pẹlu awọn itọsi kekere ti awo ilu iparun, awọn blebs ti o jọra ni iwọn si awọn micronuclei; (5) awọn sẹẹli karyolyzed: awọn sẹẹli pẹlu itọka ti aarin nikan laisi ohun elo inu; (6) awọn sẹẹli ti a ṣe akiyesi: awọn sẹẹli ti o ni awọn ekuro pẹlu awọn dojuijako ti o han gbangba tabi awọn notches ni apẹrẹ wọn, ti a tun pe ni awọn ekuro ti o ni apẹrẹ kidinrin; (7) awọn sẹẹli lobulated: awọn sẹẹli ti o ni awọn iṣan iparun ti o tobi ju awọn vesicles ti a mẹnuba lọ; ati (8) awọn microcells: awọn sẹẹli ti o ni awọn ekuro ati awọn cytoplasm ti o dinku. Awọn iyipada ti a ṣe afiwe pẹlu awọn abajade iṣakoso odi.
Awọn abajade idanwo majele nla (LC50) ni a ṣe atupale nipa lilo sọfitiwia GBasic ati TSK-Trimmed Spearman-Karber method74. Awọn data idanwo onibaje ti ni idanwo tẹlẹ fun deede aṣiṣe (Shapiro-Wilks) ati isokan ti iyatọ (Bartlett). Awọn abajade naa ni a ṣe atupale nipa lilo itupalẹ ọna kan ti iyatọ (ANOVA). Idanwo Tukey ni a lo lati ṣe afiwe data laarin ara wọn, ati idanwo Dunnett ni a lo lati ṣe afiwe data laarin ẹgbẹ itọju ati ẹgbẹ iṣakoso odi.
LoEC ati data NOEC ni a ṣe atupale nipa lilo idanwo Dunnett. Awọn idanwo iṣiro ni a ṣe ni lilo sọfitiwia Statistica 8.0 (StatSoft) pẹlu ipele pataki ti 95% (p <0.05).
Akoko ifiweranṣẹ: Mar-13-2025