Ìwádìí yìí ṣe àyẹ̀wò ikú, ikú aláìlópin, àti ìpalára ti ìṣòwòcypermethrinÀwọn ìlànà sí àwọn tadpoles anuran. Nínú ìdánwò líle koko náà, a dán ìṣọ̀kan 100–800 μg/L wò fún wákàtí 96. Nínú ìdánwò onígbà díẹ̀, a dán ìṣọ̀kan cypermethrin (1, 3, 6, àti 20 μg/L) wò fún ikú, lẹ́yìn náà ni a ṣe ìdánwò micronucleus àti àwọn àìlera nuclear cell ẹ̀jẹ̀ pupa fún ọjọ́ méje. LC50 ti ìṣètò cypermethrin ti ìṣòwò sí àwọn tadpoles jẹ́ 273.41 μg L−1. Nínú ìdánwò onígbà díẹ̀ náà, ìṣọ̀kan tí ó ga jùlọ (20 μg L−1) yọrí sí ikú tí ó ju 50% lọ, nítorí pé ó pa ìdajì àwọn tadpoles tí a dán wò. Ìdánwò micronucleus náà fi àwọn àbájáde pàtàkì hàn ní 6 àti 20 μg L−1 àti ọ̀pọ̀lọpọ̀ àìlera nuclear ni a rí, èyí tí ó fihàn pé ìṣètò cypermethrin ti ìṣòwò ní agbára genotoxic lòdì sí P. gracilis. Cypermethrin jẹ́ ewu gíga fún irúgbìn yìí, èyí tó fihàn pé ó lè fa ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìṣòro àti pé ó lè ní ipa lórí ìṣiṣẹ́ àyíká yìí ní ìgbà kúkúrú àti ìgbà pípẹ́. Nítorí náà, a lè parí èrò sí pé àwọn àgbékalẹ̀ cypermethrin ti ìṣòwò ní ipa búburú lórí P. gracilis.
Nítorí ìtẹ̀síwájú àwọn iṣẹ́ àgbẹ̀ àti lílo wọn lọ́nà tó jinlẹ̀iṣakoso kokoroÀwọn ìwọ̀n, àwọn ẹranko inú omi sábà máa ń fara hàn sí àwọn oògùn apakòkòrò 1,2. Ìbàjẹ́ àwọn ohun àlùmọ́nì omi nítòsí pápá oko lè ní ipa lórí ìdàgbàsókè àti ìwàláàyè àwọn ohun alààyè tí kì í ṣe àfojúsùn bíi àwọn afẹ́fẹ́ omi.
Àwọn amphibians ń di pàtàkì sí i nínú ìṣàyẹ̀wò àwọn matrices àyíká. A kà àwọn aurans sí àwọn olùtọ́kasí tó dára fún àwọn ohun ìdọ̀tí àyíká nítorí àwọn ànímọ́ àrà ọ̀tọ̀ wọn bíi àwọn ìyípo ìgbésí ayé tó díjú, ìwọ̀n ìdàgbàsókè ìdin kíákíá, ipò trophic, awọ ara tó lè wọ inú omi10,11, ìgbẹ́kẹ̀lé omi fún ìbísí12 àti ẹyin tí kò ní ààbò11,13,14. A ti fihàn pé ọ̀pọ̀lọ́ omi kékeré (Physaalaemus gracilis), tí a mọ̀ sí ọ̀pọlọ́ ẹkún, jẹ́ irú ẹ̀dá bioindicator ti ìbàjẹ́ àwọn ipakokoropaeku4,5,6,7,15. A rí irú náà ní àwọn omi tí ó dúró, àwọn agbègbè tí a dáàbò bò tàbí àwọn agbègbè tí ó ní ibùgbé oníyípadà ní Argentina, Uruguay, Paraguay àti Brazil1617 a sì kà á sí ẹni tí ó dúró ṣinṣin nípasẹ̀ ìpínsísọ IUCN nítorí ìpínsísọ rẹ̀ tí ó gbòòrò àti ìfaradà àwọn ibùgbé onírúurú18.
Àwọn ipa tí ó wà ní ìsàlẹ̀ ara ni a ti ròyìn nínú àwọn amphibians lẹ́yìn ìfarahàn sí cypermethrin, títí bí àwọn ìyípadà ìwà, ìrísí àti biochemical nínú tadpoles23,24,25, ìyípadà ikú àti àkókò ìyípadà metamorphosis, àwọn ìyípadà enzymatic, ìdínkù àṣeyọrí ìbímọ24,25, hyperactivity26, ìdínà iṣẹ́ cholinesterase27 àti àwọn ìyípadà nínú iṣẹ́ wíwẹ̀7,28. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn ìwádìí lórí àwọn ipa genotoxic ti cypermethrin nínú àwọn amphibians ní ààlà. Nítorí náà, ó ṣe pàtàkì láti ṣe àyẹ̀wò bí àwọn anuran ṣe lè fara da cypermethrin.
Ìbàjẹ́ àyíká ní ipa lórí ìdàgbàsókè àti ìdàgbàsókè déédé àwọn amphibians, ṣùgbọ́n ipa búburú tí ó burú jùlọ ni ìbàjẹ́ ìran sí DNA tí ó fa nípasẹ̀ ìfarahan àwọn egbòogi-apànìyàn13. Ìṣàyẹ̀wò ìrísí sẹ́ẹ̀lì ẹ̀jẹ̀ jẹ́ àmì pàtàkì fún ìbàjẹ́ àti ìpalára tí ó ṣeéṣe fún ohun kan sí àwọn ẹranko igbó29. Ìdánwò micronucleus jẹ́ ọ̀kan lára àwọn ọ̀nà tí a sábà máa ń lò jùlọ fún pípinnu ìpalára ìran àwọn kẹ́míkà nínú àyíká30. Ó jẹ́ ọ̀nà kíákíá, tí ó munadoko àti tí kò wọ́n tí ó jẹ́ àmì rere ti ìpalára kẹ́míkà ti àwọn ohun alààyè bíi amphibians31,32 ó sì lè pèsè ìwífún lórí ìfarahàn sí àwọn èròjà onípalára onípalára onípalára33.
Ète ìwádìí yìí ni láti ṣe àyẹ̀wò agbára majele ti àwọn àgbékalẹ̀ cypermethrin ti ìṣòwò sí àwọn tadpoles omi kéékèèké nípa lílo ìdánwò micronucleus àti ìṣàyẹ̀wò ewu àyíká.
Ikú àpapọ̀ (%) ti àwọn P. gracilis tadpoles tí wọ́n fara hàn sí onírúurú ìwọ̀n cypermethrin tí wọ́n ń lò ní àkókò líle koko ti ìdánwò náà.
Ikú àpapọ̀ (%) ti àwọn P. gracilis tadpoles tí wọ́n fara hàn sí onírúurú ìwọ̀n cypermethrin tí wọ́n ń lò nígbà ìdánwò onígbà pípẹ́.
Ikú gíga tí a rí jẹ́ àbájáde àwọn ipa oníṣekúṣe nínú àwọn amphibians tí wọ́n fara hàn sí onírúurú ìpele cypermethrin (6 àti 20 μg/L), gẹ́gẹ́ bí a ti rí i nípasẹ̀ wíwà micronuclei (MN) àti àwọn àìlera nuclear nínú erythrocytes. Ìṣẹ̀dá MN fi àwọn àṣìṣe hàn nínú mitosis ó sì ní í ṣe pẹ̀lú ìsopọ̀ tí kò dára ti àwọn krómósómù sí àwọn microtubules, àwọn àbùkù nínú àwọn àkópọ̀ amuaradagba tí ó jẹ́ olórí fún gbígbà krómósómù àti gbigbe, àwọn àṣìṣe nínú ìpínyà krómósómù àti àwọn àṣìṣe nínú àtúnṣe ìbàjẹ́ DNA38,39 ó sì le jẹ́ mọ́ stress oxidative tí ó fa ipakokoro40,41. Àwọn àìlera mìíràn ni a ṣe àkíyèsí ní gbogbo àwọn ìpele tí a ṣe àyẹ̀wò. Pípọ̀ sí i àwọn ìpele cypermethrin mú kí àwọn àìlera nuclear nínú erythrocytes pọ̀ sí i ní 5% àti 20% ní ìwọ̀n tí ó kéré jùlọ (1 μg/L) àti èyí tí ó ga jùlọ (20 μg/L), lẹ́sẹẹsẹ. Fún àpẹẹrẹ, àwọn ìyípadà nínú DNA ti irú kan le ní àwọn àbájáde búburú fún ìwàláàyè ìgbà kúkúrú àti ìgbà pípẹ́, èyí tí ó yọrí sí ìdínkù iye ènìyàn, ìyípadà ìlera ìbímọ, ìdànù onírúurú ìran, àti àwọn ìwọ̀n ìṣípòpadà tí ó yípadà. Gbogbo àwọn nǹkan wọ̀nyí lè ní ipa lórí ìwàláàyè àti ìtọ́jú àwọn ẹ̀dá 42,43. Ìṣẹ̀dá àwọn àìlera erythroid lè fi hàn pé cytokines kan wà nínú rẹ̀, èyí tó máa ń yọrí sí ìpínyà sẹ́ẹ̀lì tí kò dára (àwọn sẹ́ẹ̀lì oní-bínúkúùkù)44,45; àwọn nọ́ńbà oní-lóbìí púpọ̀ jẹ́ àwọn ìtújáde ti àwọ̀ ara núkléùkù pẹ̀lú ọ̀pọ̀lọpọ̀ lobes46, nígbà tí àwọn àìlera erythroid mìíràn lè ní í ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè DNA, bíi kíndìnrín/blebs47. Wíwà àwọn erythrocytes tí anucleated lè fi hàn pé ìrìnnà atẹ́gùn kò ṣiṣẹ́ dáadáa, pàápàá jùlọ nínú omi tí ó ti bàjẹ́48,49. Apoptosis fi ikú sẹ́ẹ̀lì hàn50.
Àwọn ìwádìí mìíràn tún ti fi àwọn ipa tó léwu ti cypermethrin hàn. Kabaña àti àwọn ẹlòmíràn 51 fi hàn pé àwọn micronuclei àti àwọn ìyípadà nuclear bíi àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a ti yọ kúrò nínú ẹ̀jẹ̀ àti àwọn sẹ́ẹ̀lì apoptotic nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì Odontophrynus americanus lẹ́yìn tí wọ́n fi ara wọn hàn sí àwọn ìfọ́pọ̀ cypermethrin gíga (5000 àti 10,000 μg L−1) fún wákàtí 96. A tún rí apoptosis tí Cypermethrin fà nínú P. biligonigerus52 àti Rhinella arenarum53. Àwọn àbájáde wọ̀nyí fihàn pé cypermethrin ní àwọn ipa tó léwu lórí onírúurú àwọn ohun alààyè inú omi àti pé ìdánwò MN àti ENA lè jẹ́ àmì àwọn ipa tó léwu lórí àwọn amphibians àti pé ó lè wúlò fún àwọn ẹ̀yà ìbílẹ̀ àti àwọn ènìyàn ìgbẹ́ tí wọ́n fara hàn sí àwọn ohun tó léwu12.
Àwọn ìlànà ìṣòwò ti cypermethrin jẹ́ ewu ńlá fún àyíká (àti onígbà díẹ̀ àti onígbà díẹ̀), pẹ̀lú àwọn olórí ilé-iṣẹ́ tó ju ìpele US Environmental Protection Agency (EPA) lọ 54 tí ó lè ní ipa búburú lórí irúgbìn tí ó bá wà nínú àyíká. Nínú ìṣàyẹ̀wò ewu onígbà díẹ̀, NOEC fún ikú jẹ́ 3 μg L−1, èyí tí ó jẹ́rìí sí i pé ìwọ̀n tí a rí nínú omi lè fa ewu fún irúgbìn náà55. NOEC apani fún àwọn ìdin R. arenarum tí a fi sí àdàpọ̀ endosulfan àti cypermethrin jẹ́ 500 μg L−1 lẹ́yìn wákàtí 168; iye yìí dínkù sí 0.0005 μg L−1 lẹ́yìn wákàtí 336. Àwọn òǹkọ̀wé fihàn pé bí ìfarahàn náà bá pẹ́ tó, bẹ́ẹ̀ náà ni ìwọ̀n tí ó lè ṣe ìpalára fún irúgbìn náà yóò ṣe dínkù sí i. Ó tún ṣe pàtàkì láti tẹnu mọ́ ọn pé àwọn ìwọ̀n NOEC ga ju ti P. gracilis lọ ní àkókò ìfarahàn kan náà, èyí tí ó fihàn pé ìdáhùn irúgbìn sí cypermethrin jẹ́ ti irúgbìn pàtó. Síwájú sí i, ní ti ikú, iye CHQ ti P. gracilis lẹ́yìn tí a fi cypermethrin hàn dé 64.67, èyí tí ó ga ju iye ìtọ́kasí tí US Environmental Protection Agency54 gbé kalẹ̀, àti iye CHQ ti àwọn idin R. arenarum náà ga ju iye yìí lọ (CHQ > 388.00 lẹ́yìn wákàtí 336), èyí tí ó fihàn pé àwọn kòkòrò tí a ti kẹ́kọ̀ọ́ náà jẹ́ ewu gíga fún ọ̀pọ̀lọpọ̀ irú amphibian. Ní ríronú pé P. gracilis nílò nǹkan bí ọjọ́ 30 láti parí ìyípadà56, a lè parí èrò sí pé ìwọ̀n cypermethrin tí a ti kẹ́kọ̀ọ́ lè ṣe àfikún sí ìdínkù iye ènìyàn nípa dídènà àwọn ènìyàn tí ó ní àkóràn láti wọ inú àgbà tàbí ìpele ìbímọ ní kékeré.
Nínú ìṣirò ewu micronuclei àti àwọn àìlera erythrocyte nuclear mìíràn, àwọn ìwọ̀n CHQ wà láti 14.92 sí 97.00, èyí tó fi hàn pé cypermethrin ní ewu tó lè fa àrùn genotoxic sí P. gracilis kódà ní ibùgbé àdánidá rẹ̀. Ní gbígbé ikú yẹ̀ wò, iye tó pọ̀ jùlọ ti àwọn èròjà xenobiotic tó lè fara dà fún P. gracilis jẹ́ 4.24 μg L−1. Síbẹ̀síbẹ̀, ìwọ̀n tó kéré sí 1 μg/L tún fi àwọn ipa tó lè fa àrùn genotoxic hàn. Òtítọ́ yìí lè fa ìbísí nínú iye àwọn ènìyàn aláìlera57 ó sì lè ní ipa lórí ìdàgbàsókè àti ìbísí àwọn irú ẹ̀dá ní ibùgbé wọn, èyí tó lè fa ìdínkù nínú iye àwọn amphibian.
Àwọn àgbékalẹ̀ ìtajà ti cypermethrin egbòogi fi ìpalára gíga àti onígbà pípẹ́ hàn sí P. gracilis. A rí i pé iye ikú tó ga jù ni a rí, ó ṣeé ṣe kí ó jẹ́ nítorí àwọn ipa olóró, gẹ́gẹ́ bí a ti rí i nípasẹ̀ wíwà àwọn ìṣòro ìpalára micronuclei àti erythrocyte nucleus, pàápàá jùlọ serrated nuclei, lobed nuclei, àti vesicular nuclei. Ní àfikún, àwọn ẹ̀yà tí a kẹ́kọ̀ọ́ fi hàn pé ewu àyíká pọ̀ sí i, àti onígbà pípẹ́. Àwọn ìwádìí wọ̀nyí, pẹ̀lú àwọn ìwádìí ìṣáájú láti ọwọ́ ẹgbẹ́ ìwádìí wa, fihàn pé àwọn àgbékalẹ̀ ìtajà onírúurú ti cypermethrin ṣì ń fa ìdínkù nínú iṣẹ́ acetylcholinesterase (AChE) àti butyrylcholinesterase (BChE) àti ìdààmú oxidative58, ó sì yọrí sí àwọn ìyípadà nínú ìgbòkègbodò wíwẹ̀ àti àwọn àìlera ẹnu59 nínú P. gracilis, èyí tí ó fihàn pé àwọn àgbékalẹ̀ ìtajà ti cypermethrin ní ìpalára pípẹ́ àti pípẹ́ sí irú ẹ̀yà yìí. Hartmann àti àwọn ẹlòmíràn 60 rí i pé àwọn àgbékalẹ̀ ìtajà ti cypermethrin ni ó léwu jùlọ sí P. gracilis àti irú ẹ̀yà mìíràn ti irú kan náà (P. cuvieri) ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn oògùn olóró mẹ́sàn-án mìíràn. Èyí fihàn pé ìwọ̀n cypermethrin tí a fọwọ́ sí lábẹ́ òfin fún ààbò àyíká lè yọrí sí ikú gíga àti ìdínkù iye ènìyàn fún ìgbà pípẹ́.
Àwọn ìwádìí síwájú síi ni a nílò láti ṣe àyẹ̀wò majele ti egbòogi apanirun sí àwọn amphibians, nítorí pé ìwọ̀n tí a rí nínú àyíká lè fa ikú gíga àti ewu tí ó lè fa ewu fún P. gracilis. Ó yẹ kí a gba ìwádìí lórí àwọn amphibians níyànjú, nítorí pé ìwádìí lórí àwọn amphibians kò pọ̀ tó, pàápàá jùlọ lórí àwọn amphibians ní Brazil.
Ìdánwò majele onígbà pípẹ́ náà gba àkókò fún wákàtí 168 (ọjọ́ méje) lábẹ́ àwọn ipò àìdúróṣinṣin àti ìfọ́pọ̀ tí ó wà lábẹ́ ikú ni: 1, 3, 6 àti 20 μg ai L−1. Nínú àwọn ìdánwò méjèèjì, a ṣe àyẹ̀wò tadpoles 10 fún ẹgbẹ́ ìtọ́jú pẹ̀lú àwọn àtúnṣe mẹ́fà, fún àpapọ̀ tadpoles 60 fún ìfọ́pọ̀ kọ̀ọ̀kan. Ní àkókò kan náà, ìtọ́jú omi nìkan ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí ìdarí odi. Ìṣètò ìdánwò kọ̀ọ̀kan ní àwo gilasi aláìléwu pẹ̀lú agbára 500 milimita àti ìwọ̀n tadpoles 1 fún 50 milimita ti omi. A fi fíìmù polyethylene bo ìgò náà láti dènà ìfọ́, a sì ń mú kí afẹ́fẹ́ máa tàn kálẹ̀ nígbà gbogbo.
A ṣe àyẹ̀wò omi náà pẹ̀lú kẹ́míkà láti mọ ìwọ̀n àwọn egbòogi tí ó wà ní 0, 96, àti 168 wákàtí. Gẹ́gẹ́ bí Sabin àti àwọn ẹlòmíràn 68 àti Martins àti àwọn ẹlòmíràn 69 ti sọ, a ṣe àyẹ̀wò náà ní Pesticide Analysis Laboratory (LARP) ti Federal University of Santa Maria nípa lílo gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry (Varian model 1200, Palo Alto, California, USA). A fi ìṣàfihàn iye àwọn egbòogi tí ó wà nínú omi hàn gẹ́gẹ́ bí ohun èlò afikún (Tábìlì SM1).
Fún ìdánwò micronucleus (MNT) àti ìdánwò àìlera nuclear cell pupa (RNA), a ṣe àyẹ̀wò tadpoles 15 láti inú ẹgbẹ́ ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan. A fi lidocaine 5% (50 mg g-170) pa àwọn tadpoles náà, a sì gba àwọn àyẹ̀wò ẹ̀jẹ̀ nípa lílo abẹ́rẹ́ heparinized tí a lè sọ nù. A ṣe àwọn àyẹ̀wò ẹ̀jẹ̀ lórí àwọn àwọ̀ microscope tí a ti sọ di aláìlera, a gbẹ wọ́n ní afẹ́fẹ́, a fi methanol 100% (4 °C) ṣe é fún ìṣẹ́jú 2, lẹ́yìn náà a fi omi Giemsa 10% kùn wọ́n fún ìṣẹ́jú 15 nínú òkùnkùn. Ní ìparí iṣẹ́ náà, a fi omi tí a ti yọ kúrò nínú àwọn àwọ̀ náà, a sì gbẹ wọ́n ní iwọ̀n otútù yàrá.
Ó kéré tán, a ṣe àyẹ̀wò 1000 RBCs láti inú tadpole kọ̀ọ̀kan nípa lílo microscope 100× pẹ̀lú ète 71 láti mọ wíwà MN àti ENA. A ṣe àyẹ̀wò àpapọ̀ 75,796 RBCs láti inú tadpoles nípa gbígbé ìṣọ̀kan àti ìṣàkóso cypermethrin yẹ̀ wò. A ṣe àyẹ̀wò ìbàjẹ́ ẹ̀dá-ara gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà ti Carrasco et al. àti Fenech et al.38,72 nípa ṣíṣe àyẹ̀wò ìgbà tí àwọn ìpalára nucleus wọ̀nyí yóò wáyé: (1) àwọn sẹ́ẹ̀lì anucleate: àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò ní nucleus; (2) àwọn sẹ́ẹ̀lì apoptotic: ìpínyà nuclear, ikú sẹ́ẹ̀lì tí a ṣètò; (3) àwọn sẹ́ẹ̀lì binucleate: àwọn sẹ́ẹ̀lì pẹ̀lú nucleus méjì; (4) àwọn buds nuclear tàbí àwọn sẹ́ẹ̀lì bleb: àwọn sẹ́ẹ̀lì pẹ̀lú nucleus pẹ̀lú àwọn ìtẹ̀sí kékeré ti membrane nuclear, àwọn blebs tí ó jọra ní ìwọ̀n micronuclei; (5) àwọn sẹ́ẹ̀lì karyolyzed: àwọn sẹ́ẹ̀lì pẹ̀lú ìtòlẹ́sẹẹsẹ nucleus láìsí ohun èlò inú; (6) àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a ti mọ: àwọn sẹ́ẹ̀lì tí ó ní nucleus pẹ̀lú àwọn ìfọ́ tàbí àwọn ihò tí ó hàn gbangba ní ìrísí wọn, tí a tún ń pè ní nucleus onírísí kíndìnrín; (7) àwọn sẹ́ẹ̀lì onígun mẹ́rin: àwọn sẹ́ẹ̀lì pẹ̀lú àwọn ìtújáde átọ́míìkì tó tóbi ju àwọn vesicles tí a mẹ́nu kàn tẹ́lẹ̀ lọ; àti (8) àwọn sẹ́ẹ̀lì kéékèèké: àwọn sẹ́ẹ̀lì pẹ̀lú àwọn núìkúùlù tí a ti dìpọ̀ àti àwọn sẹ́ẹ̀lì cytoplasm tí ó dínkù. A fi àwọn àyípadà náà wé àwọn àbájáde ìṣàkóso odi.
A ṣe àyẹ̀wò àwọn àbájáde ìdánwò tó léwu (LC50) nípa lílo sọ́fítíwè GBasic àti ọ̀nà TSK-Trimmed Spearman-Karber74. A ti ṣe àyẹ̀wò àwọn dátà ìdánwò onígbà díẹ̀ fún ìdúróṣinṣin àṣìṣe (Shapiro-Wilks) àti ìṣọ̀kan ìyàtọ̀ (Bartlett). A ṣe àyẹ̀wò àwọn àbájáde náà nípa lílo ìṣàyẹ̀wò ìyàtọ̀ ọ̀nà kan (ANOVA). A lo ìdánwò Tukey láti fi wé dátà láàárín ara wọn, a sì lo ìdánwò Dunnett láti fi wé dátà láàrín ẹgbẹ́ ìtọ́jú àti ẹgbẹ́ ìdarí odi.
A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìwádìí LOEC àti NOEC nípa lílo ìdánwò Dunnett. A ṣe àwọn ìdánwò ìṣirò nípa lílo sọ́fítíwètì Statistica 8.0 (StatSoft) pẹ̀lú ìpele pàtàkì ti 95% (p < 0.05).
Àkókò ìfìwéránṣẹ́: Oṣù Kẹta-13-2025