Phosphorylation n mu oluṣakoso idagbasoke idagbasoke titun ṣiṣẹ DELLA, igbega si isọmọ histone H2A si chromatin ni Arabidopsis.

Awọn ọlọjẹ DELLA ti wa ni ipamọawọn olutọsọna idagbasoketi o ṣe ipa aringbungbun ni idagbasoke ọgbin ni idahun si awọn ifihan agbara inu ati ita. Gẹgẹbi awọn olutọsọna transcriptional, DELLAs sopọ mọ awọn ifosiwewe transcription (TFs) ati histone H2A nipasẹ awọn agbegbe GRAS wọn ati pe wọn gba iṣẹ lati ṣe lori awọn olupolowo. Awọn ijinlẹ aipẹ ti fihan pe iduroṣinṣin DELLA jẹ ilana lẹhin-itumọ nipasẹ awọn ọna ṣiṣe meji: polyubiquitination ti o fa nipasẹ homonu ọgbin.gibberellin, eyiti o yori si ibajẹ iyara wọn, ati isọdọkan pẹlu iyipada kekere ubiquitin-like (SUMO), eyiti o mu ki ikojọpọ wọn pọ si. Pẹlupẹlu, iṣẹ-ṣiṣe DELLA jẹ ilana ti agbara nipasẹ awọn ọna ṣiṣe glycosylation ọtọtọ meji: O-fucosylation ṣe alekun ibaraenisepo DELLA-TF, lakoko ti iyipada N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ti o ni asopọ O ṣe idiwọ ibaraenisepo DELLA-TF. Sibẹsibẹ, ipa ti DELLA phosphorylation jẹ koyewa bi awọn iwadii iṣaaju ti ṣe afihan awọn abajade ikọlura, pẹlu diẹ ninu ni iyanju pe phosphorylation ṣe igbega tabi ṣe atunṣe ibajẹ DELLA ati awọn miiran ni iyanju pe phosphorylation ko ni ipa lori iduroṣinṣin wọn. Nibi, a ṣe idanimọ awọn aaye phosphorylation ni GA1-3 repressor (RGA), AtDELLA, ti a sọ di mimọ lati Arabidopsis thaliana nipasẹ spectrometry pupọ ati fihan pe phosphorylation ti awọn peptides RGA meji ni awọn agbegbe PolyS ati PolyS/T n mu iṣẹ RGA ṣiṣẹ nipasẹ igbega H2A abuda ati ajọṣepọ RGA pẹlu awọn olupolowo. Ni pataki, phosphorylation ko ni ipa awọn ibaraẹnisọrọ RGA-TF tabi iduroṣinṣin RGA. Iwadii wa ṣe afihan ẹrọ molikula nipasẹ eyiti phosphorylation nfa iṣẹ ṣiṣe DELLA.
Atupalẹ iwoye titobi wa fi han pe mejeeji Pep1 ati Pep2 jẹ phosphorylated gíga ni RGA ni ẹhin GA-aipe Ga1. Ni afikun si iwadi yii, awọn ijinlẹ phosphoproteomic ti tun ṣe afihan Pep1 phosphorylation ni RGA, biotilejepe ipa rẹ ko ti ni iwadi53,54,55. Ni idakeji, Pep2 phosphorylation ko ti ṣe apejuwe tẹlẹ niwon peptide yii le ṣee rii nikan ni lilo transgene RGAGKG. Botilẹjẹpe iyipada m1A, eyiti o pa Pep1 phosphorylation kuro, iṣẹ ṣiṣe RGA diẹ dinku ni ọgbin ọgbin, o ni ipa aropo nigbati o ba darapọ pẹlu m2A ni idinku iṣẹ RGA (Afikun Aworan 6). Ni pataki, Pep1 phosphorylation ti dinku ni pataki ni GA-imudara sly1 mutant ni akawe si ga1, ni iyanju pe GA ṣe igbega dephosphorylation RGA, dinku iṣẹ ṣiṣe rẹ. Ilana nipasẹ eyiti GA ṣe fipa RGA phosphorylation nilo iwadii siwaju sii. O ṣeeṣe kan ni pe eyi waye nipasẹ ilana ti kinase amuaradagba ti a ko mọ. Biotilejepe awọn ijinlẹ ti fihan pe ikosile ti CK1 protein kinase EL1 ti wa ni isalẹ nipasẹ GA ni rice41, awọn abajade wa fihan pe awọn iyipada ti o ga julọ ti Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) ko dinku RGA phosphorylation. Ni ibamu pẹlu awọn abajade wa, iwadii phosphoproteomic aipẹ kan nipa lilo awọn laini iwọn apọju Arabidopsis AEL ati mutant ael meteta ko ṣe idanimọ eyikeyi awọn ọlọjẹ DELLA bi awọn sobusitireti ti awọn kinases56. Nigba ti a ba pese iwe afọwọkọ naa, a royin pe GSK3, jiini ti n ṣe koodu GSK3/SHAGGY-like kinase ni alikama (Triticum aestivum), le phosphorylate DELLA (Rht-B1b)57, botilẹjẹpe phosphorylation ti Rht-B1b nipasẹ GSK3 ko ti jẹrisi ni ọgbin. Awọn aati enzymatiki in vitro ni iwaju GSK3 ti o tẹle nipasẹ itupalẹ ọpọ iwoye fi han awọn aaye phosphorylation mẹta ti o wa laarin awọn agbegbe DELLA ati GRAS ti Rht-B1b (Afikun 3). Serine si awọn aropo alanine ni gbogbo awọn aaye phosphorylation mẹta yorisi idinku iṣẹ Rht-B1b ni alikama transgenic, ni ibamu pẹlu awọn awari wa pe awọn aropo alanine ni Pep2 RGA dinku iṣẹ RGA. Sibẹsibẹ, awọn igbelewọn ibajẹ amuaradagba in vitro fihan siwaju pe phosphorylation tun le ṣe iduroṣinṣin Rht-B1b57. Eyi jẹ iyatọ si awọn abajade wa ti n fihan pe awọn aropo alanine ni Pep2 RGA ko paarọ iduroṣinṣin rẹ ni ọgbin. GSK3 ni alikama jẹ ortholog ti brassinosteroid-insensitive protein 2 (BIN2) ni Arabidopsis 57. BIN2 jẹ oluṣakoso odi ti ifihan agbara BR, ati pe BR n mu ipa ọna ifihan rẹ ṣiṣẹ nipa jijẹ ibajẹ BIN2 58. A fihan pe itọju BR ko dinku RGA RGA 59 tabi awọn ipele phospple ti o ni imọran ni awọn ipele phosppleid2 ti Arab (Supplement) ko ṣeeṣe lati jẹ phosphorylated nipasẹ BIN2.
Gbogbo data pipo ni a ṣe atupale ni iṣiro nipa lilo Excel, ati pe a pinnu awọn iyatọ pataki nipa lilo t-idanwo Ọmọ ile-iwe. Ko si awọn ọna iṣiro ti a lo lati ṣaju-ipinnu iwọn ayẹwo. Ko si data ti a yọkuro lati inu itupalẹ; ṣàdánwò ti a ko ti aileto; ati awọn oniwadi mọ nipa ipinfunni lakoko idanwo ati igbelewọn abajade. Awọn iwọn apẹẹrẹ ni a pese ni awọn arosọ eeya ati ninu awọn faili data aise.