Fọ́sífórílísó náà ń mú kí olùṣàkóso ìdàgbàsókè DELLA ṣiṣẹ́, ó sì ń mú kí ìsopọ̀ histone H2A pẹ̀lú chromatin nínú Arabidopsis pọ̀ sí i.

A ń tọ́jú àwọn èròjà DELLAawọn olutọsọna idagbasoketí ó ń kó ipa pàtàkì nínú ìdàgbàsókè ewéko ní ìdáhùn sí àwọn àmì inú àti òde. Gẹ́gẹ́ bí àwọn olùṣàkóso ìkọ̀wé, DELLAs so mọ́ àwọn ohun tí ń fa ìkọ̀wé (TFs) àti histone H2A nípasẹ̀ àwọn agbègbè GRAS wọn, wọ́n sì ń ṣiṣẹ́ lórí àwọn olùgbékalẹ̀. Àwọn ìwádìí tuntun ti fihàn pé ìdúróṣinṣin DELLA ni a ń ṣàkóso lẹ́yìn ìtumọ̀ nípasẹ̀ ọ̀nà méjì: polyubiquitination tí homonu ewéko fàgibberellin, èyí tí ó ń yọrí sí ìbàjẹ́ kíákíá wọn, àti ìsopọ̀ pẹ̀lú àwọn ohun èlò ìyípadà bí ubiquitin kékeré (SUMO), èyí tí ó ń mú kí ìkójọpọ̀ wọn pọ̀ sí i. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ìṣiṣẹ́ DELLA ni a ń ṣe àkóso nípasẹ̀ àwọn ọ̀nà glycosylation méjì ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀: O-fucosylation mú kí ìbáṣepọ̀ DELLA-TF pọ̀ sí i, nígbà tí ìyípadà O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ń dí ìbáṣepọ̀ DELLA-TF lọ́wọ́. Síbẹ̀síbẹ̀, ipa ti DELLA phosphorylation kò ṣe kedere bí àwọn ìwádìí ìṣáájú ti fi àwọn àbájáde tí ó takora hàn, pẹ̀lú àwọn kan tí wọ́n dámọ̀ràn pé phosphorylation ń gbé ìbàjẹ́ DELLA lárugẹ tàbí ń pa àwọn mìíràn tí wọ́n dámọ̀ràn pé phosphorylation kò ní ipa lórí ìdúróṣinṣin wọn. Níbí, a ṣàfihàn àwọn ibi tí phosphorylation wà nínú GA1-3 repressor (RGA), AtDELLA, tí a wẹ̀ mọ́ kúrò nínú Arabidopsis thaliana nípa spectrometry mass àti fihàn pé phosphorylation ti àwọn peptides RGA méjì nínú àwọn agbègbè PolyS àti PolyS/T ń mú ìṣiṣẹ́ RGA pọ̀ sí i nípa gbígbé ìsopọ̀ H2A àti ìbáṣepọ̀ RGA pẹ̀lú àwọn olùgbékalẹ̀ àfojúsùn lárugẹ. Lóòótọ́, phosphorylation kò ní ipa lórí ìbáṣepọ̀ RGA-TF tàbí ìdúróṣinṣin RGA. Ìwádìí wa fi hàn pé ètò ìṣiṣẹ́ molikula kan tí phosphorylation fi ń fa ìṣiṣẹ́ DELLA hàn.
Àyẹ̀wò ìṣàyẹ̀wò mass spectrometric wa fi hàn pé Pep1 àti Pep2 ní phosphorylation gíga nínú RGA nínú Ga1 tí kò ní GA. Ní àfikún sí ìwádìí yìí, àwọn ìwádìí phosphoproteomic tún ti fi phosphorylation Pep1 hàn nínú RGA, bó tilẹ̀ jẹ́ pé a kò tí ì ṣe ìwádìí nípa ipa rẹ̀53,54,55. Ní ìyàtọ̀ sí èyí, a kò tí ì ṣàlàyé phosphorylation Pep2 tẹ́lẹ̀ nítorí pé a lè rí peptide yìí nípa lílo transgene RGAGKG nìkan. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìyípadà m1A, èyí tí ó pa phosphorylation Pep1 run, dín iṣẹ́ RGA díẹ̀ kù nínú planta, ó ní ipa afikún nígbà tí a bá so pọ̀ mọ́ m2A nínú dín iṣẹ́ RGA kù (Àwòrán Àfikún 6). Ní ​​pàtàkì, phosphorylation Pep1 dínkù gidigidi nínú sly1 mutant tí a mú dara sí GA ní ìfiwéra pẹ̀lú ga1, èyí tí ó fihàn pé GA ń gbé dephosphorylation RGA lárugẹ, ó sì ń dín iṣẹ́ rẹ̀ kù. Ọ̀nà tí GA ń gbà dín phosphorylation RGA kù nílò ìwádìí síwájú sí i. Ó ṣeé ṣe kí èyí ṣẹlẹ̀ nípasẹ̀ ìṣàkóso protein kinase tí a kò mọ̀. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn ìwádìí ti fihàn pé ìfarahàn protein kinase EL1 CK1 ni GA dínkù nínú rice41, àwọn àbájáde wa fihàn pé àwọn ìyípadà gíga ti Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) kò dín phosphorylation RGA kù. Ní ìbámu pẹ̀lú àwọn àbájáde wa, ìwádìí phosphoproteomic tuntun kan nípa lílo àwọn ìlà tí ń fihàn ju bó ṣe yẹ lọ ti Arabidopsis AEL àti ael triple mutant kò fi àwọn protein DELLA kankan hàn gẹ́gẹ́ bí àwọn substrate ti kinases56 wọ̀nyí. Nígbà tí a pèsè ìwé àfọwọ́kọ náà, a ròyìn pé GSK3, jínì tí ó ń ṣàkójọ kinase bíi GSK3/SHAGY nínú àlìkámà (Triticum aestivum), lè phosphorylate DELLA (Rht-B1b)57, bó tilẹ̀ jẹ́ pé a kò tíì fi hàn pé phosphorylation ti Rht-B1b láti ọwọ́ GSK3 nínú planta. In vitro enzymatic reactions ní iwájú GSK3 tí a tẹ̀lé pẹ̀lú mass spectrometry analysis fi àwọn ibi phosphorylation mẹ́ta tí ó wà láàrín àwọn agbègbè DELLA àti GRAS ti Rht-B1b hàn (Àfikún Àwòrán 3). Àwọn ìyípadà Serine sí Alanine ní gbogbo àwọn ibi phosphorylation mẹ́ta yọrí sí ìdínkù iṣẹ́ Rht-B1b nínú àlìkámà transgenic, gẹ́gẹ́ bí àwọn àwárí wa ti ṣe pé ìyípadà alanine nínú Pep2 RGA dín ìṣiṣẹ́ RGA kù. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn àyẹ̀wò ìbàjẹ́ amuaradagba nínú vitro tún fi hàn pé phosphorylation tún lè mú kí Rht-B1b57 dúró ṣinṣin. Èyí yàtọ̀ sí àwọn àbájáde wa tí ó fihàn pé ìyípadà alanine nínú Pep2 RGA kò yí ìdúróṣinṣin rẹ̀ padà nínú planta. GSK3 nínú àlìkámà jẹ́ ortholog ti brassinosteroid-insensitive protein 2 (BIN2) nínú Arabidopsis 57. BIN2 jẹ́ olùṣàkóso odi ti ìfàmì sí BR, BR sì ń mú ipa ọ̀nà ìfàmì sí i ṣiṣẹ́ nípa ṣíṣe ìbàjẹ́ BIN2 58. A fihàn pé ìtọ́jú BR kò dín ìdúróṣinṣin RGA 59 tàbí ìpele phosphorylation nínú Arabidopsis kù (Àwòrán Àfikún 2), èyí tí ó fihàn pé BIN2 kò ṣeéṣe kí RGA jẹ́ phosphorylation.
A ṣe àyẹ̀wò gbogbo data iye ni iṣiro nipa lilo Excel, a sì pinnu awọn iyatọ pataki nipa lilo idanwo t ti ọmọ ile-iwe. A ko lo awọn ọna iṣiro lati pinnu iwọn ayẹwo ṣaaju. A ko yọ data kuro ninu itupalẹ naa; a ko ṣe idanwo naa laileto; awọn oluwadi si mọ nipa pinpin lakoko idanwo naa ati iṣayẹwo abajade. Awọn iwọn ayẹwo ni a pese ninu awọn itan-akọọlẹ aworan ati ninu awọn faili data aise.