Nínú ìwádìí yìí, àwọn ipa ìfúnni ní ìtọ́jú àpapọ̀ tiawọn olutọsọna idagbasoke ọgbin(2,4-D àti kinetin) àti àwọn nanoparticles iron oxide (Fe₃O₄-NPs) lórí in vitro morphogenesis àti ìṣẹ̀dá metabolite kejì nínú *Hypericum perforatum* L. ni a ṣe ìwádìí rẹ̀. Ìtọ́jú tí a ṣe àtúnṣe [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] mú kí àwọn ìlànà ìdàgbàsókè ewéko sunwọ̀n síi: gíga ewéko pọ̀ sí i ní 59.6%, gígùn gbòǹgbò rẹ̀ ní 114.0%, nọ́mbà ewéko ní 180.0%, àti ìwọ̀n tuntun callus ní 198.3% ní ìfiwéra pẹ̀lú ẹgbẹ́ ìṣàkóso. Ìtọ́jú àpapọ̀ yìí tún mú kí ìṣiṣẹ́ àtúnṣe (50.85%) sunwọ̀n síi, ó sì mú kí ìwọ̀n hypericin pọ̀ sí i ní 66.6%. Àyẹ̀wò GC-MS fi hàn pé àwọn ohun tó ní hyperoside, β-patholene, àti cetyl alcohol pọ̀, èyí tó jẹ́ 93.36% gbogbo agbègbè tó ga jùlọ, nígbà tí àwọn ohun tó ní phenolics àti flavonoids pọ̀ sí i tó 80.1%. Àwọn àbájáde wọ̀nyí fi hàn pé àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko (PGRs) àti àwọn nanoparticles Fe₃O₄ (Fe₃O₄-NPs) ní ipa ìṣọ̀kan nípa fífún organogenesis àti ìkójọpọ̀ àwọn ohun tó ní ipa nínú ara, èyí tó dúró fún ètò tó dájú fún ìdàgbàsókè ìmọ̀-ẹ̀rọ ti àwọn ewéko ìṣègùn.
Wort St. John (Hypericum perforatum L.), tí a tún mọ̀ sí wort St. John, jẹ́ ewéko ewéko tí ó máa ń wà fún ìgbà pípẹ́ láti ìdílé Hypericaceae tí ó ní ìníyelórí ọrọ̀ ajé.[1] Àwọn èròjà bioactive tí ó lè ṣiṣẹ́ nínú rẹ̀ ní àwọn tannins àdánidá, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin àti pseudohyperin), flavonoids, phenolic acids, àti àwọn epo pàtàkì.[2,3,4] A lè gbin wort St. John nípasẹ̀ àwọn ọ̀nà ìbílẹ̀; síbẹ̀síbẹ̀, àkókò tí àwọn ọ̀nà ìbílẹ̀ ń gbà ṣiṣẹ́, ìbísí irúgbìn tí kò pọ̀, àti ìfaradà sí àwọn àrùn ń dín agbára rẹ̀ kù fún ìdàgbàsókè ńlá àti ìṣẹ̀dá àwọn metabolites kejì tí ń bá a lọ.[1,5,6]
Nítorí náà, a kà àṣà ìṣẹ̀dá àsopọ̀ in vitro sí ọ̀nà tó gbéṣẹ́ fún ìtànkálẹ̀ ewéko kíákíá, ìtọ́jú àwọn ohun àlùmọ́nì germplasm, àti ìbísí àwọn èròjà ìṣègùn [7, 8]. Àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko (PGRs) ń kó ipa pàtàkì nínú ṣíṣàkóso morphogenesis wọ́n sì ṣe pàtàkì fún ìdàgbàsókè in vitro ti callus àti gbogbo ẹ̀dá alààyè. Ṣíṣe àtúnṣe àwọn ìfọ́pọ̀ wọn àti àpapọ̀ wọn ṣe pàtàkì fún ìparí àwọn ìlànà ìdàgbàsókè wọ̀nyí [9]. Nítorí náà, òye ìṣọ̀kan àti ìfọ́pọ̀ àwọn olùṣàkóso tó yẹ ṣe pàtàkì fún mímú ìdàgbàsókè àti agbára ìtúnṣe ti St. John's wort (H. perforatum) sunwọ̀n síi [10].
Àwọn nanoparticles Iron oxide (Fe₃O₄) jẹ́ àwọn nanoparticles tí a ti ṣe tàbí tí a ń ṣe àgbékalẹ̀ fún àṣà àsopọ. Fe₃O₄ ní àwọn ànímọ́ magnetic pàtàkì, ìbáramu bio tó dára, àti agbára láti gbé ìdàgbàsókè ewéko lárugẹ àti láti dín wahala àyíká kù, nítorí náà ó ti fa àfiyèsí púpọ̀ nínú àwọn àpẹẹrẹ àṣà àsopọ. Àwọn lílo àwọn nanoparticles wọ̀nyí lè ní nínú ṣíṣe àtúnṣe àṣà in vitro láti gbé ìpín sẹ́ẹ̀lì lárugẹ, mú kí ìgba oúnjẹ sunwọ̀n síi, àti mú kí àwọn enzymes antioxidant ṣiṣẹ́ [11].
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn nanoparticles ti fi ipa rere hàn lórí ìdàgbàsókè ewéko, àwọn ìwádìí lórí ìlò àpapọ̀ àwọn nanoparticles Fe₃O₄ àti àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko tí a ṣe àtúnṣe nínú *H. perforatum* ṣì ṣọ̀wọ́n. Láti kún àlà ìmọ̀ yìí, ìwádìí yìí ṣe àyẹ̀wò àwọn ipa àpapọ̀ wọn lórí in vitro morphogenesis àti ìṣẹ̀dá metabolite kejì láti fúnni ní òye tuntun fún mímú àwọn ànímọ́ ewéko ìṣègùn sunwọ̀n síi. Nítorí náà, ìwádìí yìí ní ète méjì: (1) mú kí ìṣọ̀kan àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko sunwọ̀n síi láti gbé ìṣẹ̀dá callus, ìtúnṣe ìbọn, àti rúgúdù nínú in vitro ní ọ̀nà tó dára; àti (2) ṣe àyẹ̀wò àwọn ipa ti àwọn nanoparticles Fe₃O₄ lórí àwọn ìlànà ìdàgbàsókè nínú in vitro. Àwọn ètò ọjọ́ iwájú pẹ̀lú ṣíṣe àyẹ̀wò ìwọ̀n ìwàláàyè àwọn ewéko tí a túnṣe nígbà ìfàmọ́ra (in vitro). A retí pé àwọn àbájáde ìwádìí yìí yóò mú kí agbára ìdàgbàsókè micropropagation *H. perforatum* sunwọ̀n síi, nípa bẹ́ẹ̀ yóò ṣe àfikún sí lílo àti lílo ìmọ̀-ẹ̀rọ ti ewéko ìṣègùn pàtàkì yìí.
Nínú ìwádìí yìí, a gba àwọn ewé ìgbó láti inú àwọn ewéko St. John's wort tí wọ́n ń gbìn lọ́dọọdún (ìyá ewéko). Wọ́n lo àwọn ewé ìgbó wọ̀nyí láti mú kí àwọn ipò ìgbó in vitro sunwọ̀n síi. Kí wọ́n tó gbìn wọ́n, wọ́n fi omi tí wọ́n ti yọ́ dànù wẹ́wẹ́ fọ àwọn ewé náà dáadáa fún ìṣẹ́jú díẹ̀. Lẹ́yìn náà, wọ́n fi omi ethanol 70% wẹ̀ wọ́n fún ìṣẹ́jú àáyá 30, lẹ́yìn náà wọ́n fi omi sodium hypochlorite (NaOCl) 1.5% tí ó ní ìṣàn díẹ̀ ti Tween 20 fún ìṣẹ́jú 10. Níkẹyìn, wọ́n fi omi tí wọ́n ti yọ́ dànù fọ àwọn ewé ìgbó náà nígbà mẹ́ta kí wọ́n tó gbé e lọ sí ibi tí wọ́n ti ń gbin ewéko mìíràn.
Láàárín ọ̀sẹ̀ mẹ́rin tó tẹ̀lé e, a wọn àwọn pàrámítà ìtúnṣe ìbọn, títí bí ìwọ̀n ìtúnṣe, iye ìbọn fún ìbọn kọ̀ọ̀kan, àti gígùn ìbọn náà. Nígbà tí àwọn ìbọn tí a tún ṣe dé gígùn tó o kere ju 2 cm, a gbé wọn lọ sí ibi ìbọn tí ó ní ìwọ̀n MS ààbọ̀ agbára, indolebutyric acid (IBA), àti 0.3% guar gum. Ìṣẹ̀dá ìbọn náà tẹ̀síwájú fún ọ̀sẹ̀ mẹ́ta, nígbà tí a ń wọn ìwọ̀n ìbọn, nọ́mbà gbòǹgbò, àti gígùn gbòǹgbò náà. A tún ṣe ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan ní ìgbà mẹ́ta, pẹ̀lú ìgbóná 10 tí a gbìn fún ìbọn kọ̀ọ̀kan, tí ó sì ń mú nǹkan bí 30 ìbọn jáde fún ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan.
A wọn gíga igi ní centimeters (cm) nípa lílo ruler, láti ìsàlẹ̀ igi náà títí dé orí ewé tó ga jùlọ. A wọn gígùn gbòǹgbò igi náà ní milimita (mm) lẹ́sẹ̀kẹsẹ̀ lẹ́yìn tí a ti yọ àwọn igi náà kúrò pẹ̀lú ìṣọ́ra tí a sì ti yọ àwọn igi tó ń dàgbà kúrò. A ka iye àwọn igi tó wà lórí igi kọ̀ọ̀kan tààrà. A wo iye àwọn àmì dúdú tó wà lórí ewé náà, tí a mọ̀ sí nodules. Àwọn nodules dúdú wọ̀nyí ni a gbàgbọ́ pé wọ́n jẹ́ àwọn gáàdì tó ní hypericin, tàbí àwọn àmì oxidative, a sì lò wọ́n gẹ́gẹ́ bí àmì ìtọ́kasí nípa ìdáhùn igi náà sí ìtọ́jú. Lẹ́yìn tí a ti yọ gbogbo àwọn igi tó ń dàgbà kúrò, a fi ìwọ̀n elétíróníkì pẹ̀lú ìpéye milligrams (mg) wọn ìwọ̀n tuntun ti àwọn igi náà.
Ọ̀nà tí a gbà ń ṣírò ìwọ̀n ìṣẹ̀dá callus nìyí: lẹ́yìn tí a bá ti gbin àwọn ohun tí a gbìn sínú ohun tí ó ní onírúurú àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè (kinases, 2,4-D, àti Fe3O4) fún ọ̀sẹ̀ mẹ́rin, a ó ka iye àwọn ohun tí a gbìn tí ó lè ṣe callus. Fọ́múlá fún ṣírò ìwọ̀n ìṣẹ̀dá callus nìyí:
A tun ṣe itọju kọọkan ni igba mẹta, pẹlu o kere ju awọn alaye 10 ti a ṣe ayẹwo ni atunwi kọọkan.
Ìwọ̀n àtúnbí náà fi ìwọ̀n àsopọ callus hàn tí ó parí iṣẹ́ ìyàtọ̀ ewé lẹ́yìn ìpele ìṣẹ̀dá callus. Àmì yìí fi agbára àsopọ callus hàn láti yípadà sí àsopọ tí ó yàtọ̀ síra kí ó sì dàgbà sí àwọn ẹ̀yà ara ewéko tuntun.
Iye ìfàgùn rún ni ìpíndọ́gba iye àwọn ẹ̀ka tó lè rún rún sí iye gbogbo ẹ̀ka. Àmì yìí fi àṣeyọrí ìpele rún rún hàn, èyí tó ṣe pàtàkì nínú ìdàgbàsókè kékeré àti ìdàgbàsókè ewéko, nítorí pé rún ...
A yọ àwọn èròjà Hypericin jáde pẹ̀lú 90% methanol. A fi 50 mg ti ohun èlò ewéko gbígbẹ kún 1 milimita methanol a sì fi sonicates fún 20 ìṣẹ́jú ní 30 kHz nínú ẹ̀rọ ìwẹ̀nùmọ́ ultrasonic (àwòrán A5120-3YJ) ní iwọ̀n otútù yàrá ní òkùnkùn. Lẹ́yìn sonication, a fi centrifuge àyẹ̀wò náà síta ní 6000 rpm fún ìṣẹ́jú 15. A gba supernatant náà, a sì wọn absorbance ti hypericin ní 592 nm nípa lílo Plus-3000 S spectrophotometer gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà tí Conceiçao et al. [14] ṣàlàyé.
Ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìtọ́jú pẹ̀lú àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko (PGRs) àti àwọn nanoparticles iron oxide (Fe₃O₄-NPs) kò fa ìṣẹ̀dá nodule dúdú lórí àwọn ewé tí a tún ṣe. A kò rí nodules kankan nínú èyíkéyìí nínú àwọn ìtọ́jú pẹ̀lú 0.5 tàbí 1 mg/L 2,4-D, 0.5 tàbí 1 mg/L kinetin, tàbí 1, 2, tàbí 4 mg/L iron oxide nanoparticles. Àwọn àpapọ̀ díẹ̀ fi ìdàgbàsókè nodule hàn (ṣùgbọ́n kìí ṣe pàtàkì ní ìṣirò) ní àwọn ìfọ́pọ̀ gíga ti kinetin àti/tàbí iron oxide nanoparticles, bíi àpapọ̀ 2,4-D (0.5–2 mg/L) pẹ̀lú kinetin (1–1.5 mg/L) àti iron oxide nanoparticles (2–4 mg/L). Àwọn àbájáde wọ̀nyí ni a fihàn ní Àwòrán 2. Àwọn nodules dúdú dúró fún àwọn gáàsì ọlọ́ràá hypericin, méjèèjì tí ó ń ṣẹlẹ̀ nípa ti ara àti àǹfààní. Nínú ìwádìí yìí, àwọn nodules dúdú ní í ṣe pẹ̀lú sísun awọ ara, tí ó ń fi àyíká tí ó dára hàn fún ìkójọpọ̀ hypericin. Ìtọ́jú pẹ̀lú àwọn nanoparticles 2,4-D, kinetin, àti Fe₃O₄ gbé ìdàgbàsókè callus, dín browning kù, àti àfikún akoonu chlorophyll, èyí tí ó dámọ̀ràn pé iṣẹ́ ìṣiṣẹ́ ara dára síi àti ìdínkù tí ó ṣeéṣe fún ìbàjẹ́ oxidative [37]. Ìwádìí yìí ṣe àyẹ̀wò àwọn ipa ti kinetin ní ìdàpọ̀ pẹ̀lú àwọn nanoparticles 2,4-D àti Fe₃O₄ lórí ìdàgbàsókè àti ìdàgbàsókè ti St. John's wort callus (Àwòrán 3a–g). Àwọn ìwádìí tí ó ti kọjá ti fihàn pé àwọn nanoparticles Fe₃O₄ ní àwọn iṣẹ́ antifungal àti antimicrobial [38, 39] àti, nígbà tí a bá lò ó pẹ̀lú àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko, ó lè ru àwọn ọ̀nà ìdáàbòbò ewéko sókè kí ó sì dín àwọn àmì ìdààmú sẹ́ẹ̀lì kù [18]. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a ń ṣàkóso ìṣẹ̀dá àwọn metabolites kejì, ìbísí wọn gan-an sinmi lórí àwọn ipò àyíká. Àwọn ìyípadà ti iṣelọpọ àti morphological le ní ipa lórí àwọn ìpele metabolite kejì nípa ṣíṣàkóso ìfihàn àwọn jiini ewéko pàtó àti dídáhùn sí àwọn ohun tí ó ń fa àyíká. Síwájú sí i, àwọn ohun tí ń mú kí ara ṣiṣẹ́ lè fa ìṣiṣẹ́ àwọn jínì tuntun, èyí tí ó máa ń ru ìṣiṣẹ́ enzymatic sókè, nígbẹ̀yìn-gbẹ́yín ó máa ń mú ọ̀pọ̀lọpọ̀ ipa ọ̀nà biosynthesis ṣiṣẹ́, tí ó sì máa ń yọrí sí ìṣẹ̀dá àwọn metabolites kejì. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ìwádìí mìíràn fihàn pé dídín òjìji kù máa ń mú kí ìmọ́lẹ̀ oòrùn pọ̀ sí i, nípa bẹ́ẹ̀ ó máa ń mú kí òtútù ọ̀sán pọ̀ sí i ní ibùgbé àdánidá ti *Hypericum perforatum*, èyí tí ó tún ń mú kí ìṣẹ̀dá hypericin pọ̀ sí i. Ní ìbámu pẹ̀lú àwọn ìwádìí wọ̀nyí, ìwádìí yìí ṣe ìwádìí ipa ti àwọn nanoparticles irin gẹ́gẹ́ bí àwọn ohun tí ó lè fa ìṣẹ̀dá àsopọ. Àwọn àbájáde náà fihàn pé àwọn nanoparticles wọ̀nyí lè mú àwọn jínì tí ó ní ipa nínú hesperidin biosynthesis ṣiṣẹ́ nípasẹ̀ ìfúnni enzymatic, èyí tí ó ń yọrí sí ìkójọpọ̀ èròjà yìí (Àwòrán 2). Nítorí náà, ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ewéko tí ń dàgbà lábẹ́ àwọn ipò àdánidá, a lè jiyàn pé ìṣẹ̀dá irú àwọn èròjà bẹ́ẹ̀ nínú vivo tún lè pọ̀ sí i nígbà tí a bá so wahala díẹ̀ pọ̀ mọ́ ìṣiṣẹ́ àwọn jínì tí ó ní ipa nínú biosynthesis ti àwọn metabolites kejì. Àwọn ìtọ́jú àpapọ̀ ní ipa rere lórí ìwọ̀n ìtúnpadà, ṣùgbọ́n ní àwọn ìgbà míì, ipa yìí máa ń dínkù. Ní pàtàkì, ìtọ́jú pẹ̀lú 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L kinase, àti àwọn ìfọ́pọ̀ tó yàtọ̀ síra lè mú kí ìwọ̀n àtúnṣe pọ̀ sí i ní ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ àti ní pàtàkì ní ìfiwéra pẹ̀lú ẹgbẹ́ ìṣàkóso (Àwòrán 4c). Àwọn àbájáde wọ̀nyí fihàn pé àwọn àpapọ̀ pàtó ti àwọn nanohormones lè ṣiṣẹ́ ní ìṣọ̀kan láti gbé ìdàgbàsókè ewéko àti ìṣẹ̀dá metabolites lárugẹ, èyí tí ó ṣe pàtàkì gidigidi fún àṣà ìṣẹ̀dá àsopọ ti àwọn ewéko ìṣègùn. Palmer àti Keller [50] fihàn pé ìtọ́jú 2,4-D lè fa ìṣẹ̀dá callus ní St. perforatum, nígbà tí àfikún kinase mú kí ìṣẹ̀dá callus àti àtúnṣe pọ̀ sí i ní pàtàkì. Ìpa yìí jẹ́ nítorí ìdàgbàsókè ìwọ́ntúnwọ̀nsì homonu àti ìfúnni ní ìpín sẹ́ẹ̀lì. Bal àti àwọn ẹlòmíràn [51] rí i pé ìtọ́jú Fe₃O₄-NP lè mú iṣẹ́ àwọn enzymes antioxidant pọ̀ sí i ní ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń mú kí ìdàgbàsókè gbòǹgbò nínú St. perforatum lágbára sí i. Àwọn ohun èlò àṣà tí ó ní Fe₃O₄ nanoparticles ní ìwọ̀n 0.5 mg/L, 1 mg/L, àti 1.5 mg/L mú kí ìwọ̀n ìtúnṣe àwọn ewéko flax sunwọ̀n síi [52]. Lílo kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, àti Fe₃O₄ nanoparticles mú kí ìwọ̀n ìṣẹ̀dá callus àti gbòǹgbò sunwọ̀n síi, síbẹ̀síbẹ̀, ó yẹ kí a gbé àwọn ipa ẹ̀gbẹ́ tí ó ṣeéṣe ti lílo àwọn homonu wọ̀nyí yẹ̀ wò fún ìtúnṣe in vitro. Fún àpẹẹrẹ, lílo 2,4-dichlorobenzothiazolinone tàbí kinetin fún ìgbà pípẹ́ tàbí gíga lè yọrí sí ìyàtọ̀ somatic clonal, wahala oxidative, ìrísí callus tí kò dára, tàbí vitrification. Nítorí náà, ìwọ̀n ìtúnṣe gíga kò ṣe dandan sọ àsọtẹ́lẹ̀ ìdúróṣinṣin jiini. Gbogbo àwọn ewéko tí a túnṣe yẹ kí a ṣe àyẹ̀wò nípa lílo àwọn àmì molikula (fún àpẹẹrẹ RAPD, ISSR, AFLP) tàbí ìwádìí cytogenetic láti pinnu ìṣọ̀kan wọn àti ìfarajọra wọn sí àwọn ewéko in vivo [53,54,55].
Ìwádìí yìí fihàn fún ìgbà àkọ́kọ́ pé lílo àpapọ̀ àwọn olùṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko (2,4-D àti kinetin) pẹ̀lú àwọn nanoparticles Fe₃O₄ lè mú kí morphogenesis pọ̀ sí i àti ìkójọpọ̀ àwọn metabolites bioactive pàtàkì (pẹ̀lú hypericin àti hyperoside) nínú *Hypericum perforatum*. Ìtọ́jú tí a ṣe àtúnṣe (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) kìí ṣe pé ó mú kí ìṣẹ̀dá callus, organogenesis, àti ìbísí metabolite kejì pọ̀ sí i nìkan ni, ṣùgbọ́n ó tún fi ipa ìfàsẹ́yìn díẹ̀ hàn, èyí tí ó lè mú kí ìfaradà wahala àti ìníyelórí ewéko náà sunwọ̀n sí i. Àpapọ̀ nanotechnology àti àṣà àsopọ̀ ewéko pèsè ìpìlẹ̀ tí ó dúró ṣinṣin àti tí ó gbéṣẹ́ fún ìṣẹ̀dá in vitro ti àwọn agbo ogun oogun. Àwọn àbájáde wọ̀nyí ṣí ọ̀nà sílẹ̀ fún àwọn ohun èlò ilé-iṣẹ́ àti ìwádìí ọjọ́ iwájú sí àwọn ìlànà molikula, ìṣedéédé ìwọ̀n àti ìpele jínì, nípa bẹ́ẹ̀ ó so ìwádìí pàtàkì lórí ewéko oogun pọ̀ mọ́ ìmọ̀-ẹ̀rọ biotechnology tí ó wúlò.
Àkókò ìfìwéránṣẹ́: Oṣù Kejìlá-12-2025