Ohun ọgbin ati awọn ohun elo pathogen
Olugbe iyaworan ẹgbẹ oka ti a mọ si olugbe iyipada oka (SCP) ti pese nipasẹ Dokita Pat Brown ni University of Illinois (bayi ni UC Davis).A ti ṣapejuwe rẹ tẹlẹ ati pe o jẹ ikojọpọ awọn laini oniruuru ti o yipada si aibikita-akoko fọto ati iwọn kekere lati dẹrọ idagbasoke ati idagbasoke awọn irugbin ni awọn agbegbe AMẸRIKA.Awọn laini 510 lati inu olugbe yii ni a lo ninu iwadi yii botilẹjẹpe nitori germination buburu ati awọn ọran iṣakoso didara miiran, kii ṣe gbogbo awọn ila ni a lo ni itupalẹ gbogbo awọn ami-ara mẹta.Ni ipari data lati awọn laini 345 ni a lo fun itupalẹ esi chitin, awọn laini 472 fun idahun flg22, ati 456 fun resistance TLS.B. kukisiigara LSLP18 ni a gba lati ọdọ Dokita Burt Bluhm ni University of Arkansas.
Iwọn idahun MAMP
Awọn MAMP oriṣiriṣi meji ni a lo ninu iwadi yii flg22, (Katalogi Genscript # RP19986), ati chitin .Awọn irugbin oka ni a gbin ni awọn ifibọ ti a gbe sori awọn ile ti o kun fun ile (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ninu eefin.Awọn ohun ọgbin ti wa ni omi ni ọjọ ṣaaju gbigba ayẹwo lati yago fun afikun ọrinrin ewe ni ọjọ gbigba.
Awọn laini naa jẹ laileto ati, fun awọn idi ohun elo, ni a gbin ni awọn ipele ti awọn laini 60.Fun laini kọọkan, awọn 'ikoko' mẹta ni a gbin pẹlu awọn irugbin meji fun laini.Awọn ipele ti o tẹle ni a gbin ni kete ti ipele ti iṣaaju ti ni ilọsiwaju titi ti gbogbo olugbe ti ṣe ayẹwo.Awọn ṣiṣe idanwo meji ni a ṣe fun awọn MAMP mejeeji pẹlu awọn genotypes tun-laileto ni ọkọọkan awọn ṣiṣe meji naa.
Awọn idanwo ROS ni a ṣe bi a ti ṣalaye tẹlẹ.Ni ṣoki, fun laini kọọkan, awọn irugbin mẹfa ni a gbin sinu awọn ikoko oriṣiriṣi mẹta.Lati awọn irugbin ti o yọrisi, a yan mẹta ti o da lori iṣọkan.Awọn irugbin ti o dabi dani tabi ti o ga ni pataki tabi kuru ju ọpọlọpọ lọ ni a ko lo.Awọn disiki ewe mẹrin ti iwọn ila opin 3 mm ni a yọ kuro lati apakan ti o gbooro julọ ti ewe 4th ti awọn irugbin oka ọlọjọ-15 oriṣiriṣi mẹta.Disiki kan fun ewe lati awọn ohun ọgbin meji ati awọn disiki meji lati inu ọgbin kan, pẹlu disiki keji di iṣakoso omi (wo isalẹ).Awọn disiki naa ni ọkọọkan leefofo loju 50 µl H20 ni dudu 96-daradara awo, edidi pẹlu aami aluminiomu lati yago fun ifihan si ina, ati tọju ni iwọn otutu yara ni alẹ.Ni owurọ ti o tẹle ojutu ifasẹyin kan ni lilo 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, katalogi # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Iru VI-A, Sigma-Aldrich, katalogi # P6782), ati 100 mg/ml Chitin tabi 2 μM ti Flg22.50 µl ti ojutu ifaseyin yii ni a ṣafikun si mẹta ninu awọn kanga mẹrin naa.Kanga kẹrin jẹ iṣakoso ẹlẹgàn, si eyiti ojutu idahun laisi MAMP ti ṣafikun.Kanga òfo mẹrin ti o ni omi nikan ni a tun wa ninu awo kọọkan.
Lẹhin fifi ojutu ifaseyin kun, a ṣe iwọn luminescence pẹlu lilo SynergyTM 2 oluka microplate multi-detection (BioTek) ni gbogbo iṣẹju 2 fun wakati kan.Oluka awo naa gba awọn wiwọn luminescence ni gbogbo iṣẹju 2 lakoko wakati 1 yii.Apapọ gbogbo awọn kika 31 ni a ṣe iṣiro lati fun iye fun kanga kọọkan.Iwọn ifoju fun idahun MAMP fun genotype kọọkan ni a ṣe iṣiro bi (iye iwọn luminescence apapọ ti awọn kanga esiperimenta mẹta-iye ẹlẹgàn daradara) -iyokuro apapọ iye daradara ṣofo.Awọn iye kanga òfo wà nigbagbogbo sunmo odo.
Awọn disiki bunkun tiNicotiana Benthamiana, Laini oka ti o ga ti o ga julọ (SC0003), ati laini oka kekere kan (PI 6069) tun wa pẹlu awọn iṣakoso ni kọọkan 96-daradara awo fun awọn idi iṣakoso didara.
B. kukisiigbaradi inoculum ati inoculation
B. kukisiinoculum ti pese sile bi a ti ṣalaye tẹlẹ.Ni ṣoki, awọn irugbin oka ni a fi sinu omi fun ọjọ mẹta, ti a fi omi ṣan, ti a fi sinu awọn apọn conical 1L ati autoclaved fun wakati kan ni 15psi ati 121 °C.Awọn oka won ki o inoculated pẹlu nipa 5 milimita ti macerated mycelia lati kan alabapade asa tiB. kukisiLSLP18 ya sọtọ ati fi silẹ fun ọsẹ 2 ni iwọn otutu yara, gbigbọn awọn filasi ni gbogbo ọjọ 3.Lẹhin ọsẹ 2, fungus ti o wa ninu awọn oka oka ti o wa ni afẹfẹ ti gbẹ ati lẹhinna ti o ti fipamọ ni 4 ° C titi ti abẹrẹ aaye.Inoculum kanna ni a lo fun gbogbo idanwo naa o si ṣe alabapade ni gbogbo ọdun.Fun inoculation, 6-10 awọn oka infested ni a gbe sinu igbona ti 4-5 ọsẹ ti awọn irugbin oka.Awọn spores ti o jade lati inu awọn elu wọnyi bẹrẹ ikolu ninu awọn irugbin oka kekere laarin ọsẹ kan.
Igbaradi irugbin
Ṣaaju ki o to gbingbin irugbin oka ni aaye ti a ṣe itọju pẹlu fungicide, ipakokoro, ati adalu ailewu ti o ni ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, 3% Sorpro 940 ES irugbin safener.Lẹhinna awọn irugbin ti gbẹ ni afẹfẹ fun awọn ọjọ 3 eyiti o pese ideri tinrin ti apopọ yii ni ayika awọn irugbin.Alailewu gba laaye lilo oogun oogun meji Magnum bi itọju iṣaju iṣaaju.
Igbelewọn ti Àkọlé bunkun Aami resistance
A gbin SCP naa ni Ibusọ Iwadi Awọn irugbin Aarin ni Clayton, NC ni Oṣu Karun ọjọ 14–15 2017 ati Oṣu Karun ọjọ 20, ọdun 2018 ni apẹrẹ idinaki pipe pẹlu awọn atunda esiperimenta meji ni ọran kọọkan.Awọn idanwo ni a gbin ni awọn ori ila kan 1.8 m pẹlu iwọn ila 0.9 m nipa lilo awọn irugbin 10 fun idite kan.Awọn ori ila aala meji ni a gbin ni ayika ẹba ti idanwo kọọkan lati yago fun awọn ipa eti.Awọn adanwo ni a ṣe inoculated ni Oṣu Keje 20, 2017 ati Oṣu Keje 20, 2018 ni aaye eyiti awọn ohun ọgbin oka wa ni ipele idagbasoke 3. Awọn iwọn-wonsi ni a mu lori ọkan si mẹsan irẹjẹ, nibiti awọn ohun ọgbin ti n ṣafihan awọn ami aisan ti ko gba wọle bi mẹsan ati patapata. Awọn eweko ti o ku ni a gba wọle bi ọkan.Awọn iwọn meji ni a mu ni 2017 ati awọn kika mẹrin ni 2018 ti o bẹrẹ ọsẹ meji lẹhin inoculation ni ọdun kọọkan.sAUDPC (agbegbe ti o ni idiwọn labẹ ọna lilọsiwaju arun) jẹ iṣiro gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹrin Ọjọ 01-2021